小鼠骨髓间充质干细胞培养纯度问题

feiyang

向大家请教！我养的小鼠骨髓间充质干细胞，原代长的很好，传P1长出来的细胞，看到很多大的成纤维细胞，传P2代仍有这种情况，细胞纯度很低。请问高手，我应该从哪些方面做，提高细胞纯度？谢谢大家，细胞长不好，我又急又难过。

CatchField

刚开始细胞种类比较多比较杂。传代后一些杂细胞群就回逐渐去掉。细胞形态并不能完全说明其种类。这与细胞自生的生长状态和营养条件有关，不同状态下细胞形态有差别也很正常哈。正常的骨髓间充质干细胞就是成纤维细胞样的。实在不行可以做下流试鉴定一下纯度哈。

wangxiaowei0917

回复 pekingxiaoe 的帖子5 z) A: S2 u, U. ^

) i' m; h: m% c5 `: N' w人家是收集消化2分钟消化下来的细胞，扔掉没消化下来的细胞，你刚好相反

644414915

回复 feiyang 的帖子( ]$ m+ q, t+ X7 b6 J  v
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你好，后来你的小鼠msc养出来了吗？

雁南飞

培养之前分密度梯度离心一下再进行培养吧

asejon

利用MSCs比Fibroblast贴壁快，一般2-3小时后立即换液，但是巨噬细胞铁壁更快，该如何去除呢？而且靠这种各种细胞贴壁时间也不是绝对的吧？

fordhuhudadad

各位前辈都是热心肠啊! 小弟感激不尽!6 }5 S' Z( ?  o5 Q
再谈谈小弟最近学习的情况!7 @' |7 l6 K; Q2 d: J% C. n8 C# @
Dominici M 于2006年再Cytotherapy 杂志上发表了关于人的MSC鉴定的最低标准,该标准也代表了the Mesenchymal and Tissue Stem Cell Committee of the International Society for Cellular Therapy 的半官方意见.该最低标准包括了三个方面的内容:1.在 标准的培养条件下MSC能贴壁生长;2.MSC能表达CD105,CD73,CD90,不表达CD45,CD34,CD14,CD11b,CD79alpha或CD19,及HLA-DR表面分子;3.MSC在体外能向骨细胞,脂肪细胞及软骨细胞分化.
) F/ @. F, ?4 T9 z从这个标准似乎可以这样理解,我们在MSC  engineering 实验操作中,如果上述三点都做到了,那么这个干细胞就是鉴定证实了的.

hygene

我分离的猪MSC就是“成纤维细胞”形态，不要太担心，做一下生物学特性分析看看。比如体外诱导分化，还有一些染色之类的。

fish_zbw1985

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好的  我觉得利用消化法区分这两个细胞是一个好办法

pekingxiaoe

回复 fish_zbw1985 的帖子# y2 @8 K5 c9 f8 ^. o
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可以啊，但是估计梯度离心估计不行了，其他的还可以用