茜素红染色

Sophia

昨天做了一下成骨诱导后的茜素红染色，竟然一点都没染上！大家帮忙讨论一下是什么原因呢？
7 X5 z" N6 r4 a! }; v. _我是这样做的：PBS冲洗两遍后，4%多聚甲醛固定10分钟，再PBS冲洗两遍，加入茜素红染液，37度孵育30分钟，PBS冲洗两遍，显微镜下观察，没有见到染色，后来有同学建议我再加入茜素红过夜，第二天再看，但还是没有染色！" G, ~: c( O9 ^3 b
我是成骨诱导21天后染的。我的染色过程有问题吗？

regene

把你的茜素红溶液配方贴出来，还有你细胞成骨诱导后的图片，诱导21天的话，不染色也能看到钙沉淀，且肉眼可见。

illidancui

我也染不上，纠结。/ M9 v7 w4 T  ^( `& L& H
茜素红配制2g溶于100ml三蒸水。调ph至4.57 D: j* ^% G- a
protocol上写着最多染30min就行了。不知道为什么染不上。& e. t) s" `1 s6 e/ }
成骨细胞我也染过，也没染上，应该不是细胞问题。

Sophia

茜素红溶液配方：1g左右的Ttis-base,加入100ml三蒸水调PH至8，在加入0.1g茜素红粉剂，混匀，用前过滤。照片我目前还没有拷下来，不过在显微镜下看到表明有一层不只是什么东西，别人说着不像是钙化结节，不知是什么？

小熊不杀生

茜素红以浓度为1mg/ml溶于100mlTris-HCL溶液，并调PH值为8.3，我觉得你还应该在查查你的成骨诱导培养基，有没有问题？成骨诱导培养是可以看到非常明显的聚集样生长的，而且有黑色钙沉积

上海过客

小鼠 的  成骨 是不是应该很快 ？  胚胎发育 只有18天，应该有骨细胞形成了吧？  体外诱导21天，时间太长了啊？+ s, p( k# t8 B, Z# A. c0 o
7 R. I  z7 E' c! J, G8 W

lipd09@mails

你用的是茜素红-S吗？染细胞的和染组织的茜素红不一样吧，染细胞的应该用茜素红-S吧，我也打算做茜素红染色，也在纠结中！！

regene

先配0.05M的Tris-HCl，调PH至8.2，4度保存。用前再用其配制0.1%的茜素红（现用先配），过滤，37度染色30min。未染色的钙结节在显微镜下是黑色的，比较明显～

sydfxt

可能还是诱导没成骨吧,觉得配方还可以

nightvsday

我也没染出来。。。