茜素红染色

Sophia

昨天做了一下成骨诱导后的茜素红染色，竟然一点都没染上！大家帮忙讨论一下是什么原因呢？' X, H6 Z. z# A9 U
我是这样做的：PBS冲洗两遍后，4%多聚甲醛固定10分钟，再PBS冲洗两遍，加入茜素红染液，37度孵育30分钟，PBS冲洗两遍，显微镜下观察，没有见到染色，后来有同学建议我再加入茜素红过夜，第二天再看，但还是没有染色！
+ [2 }! K% c5 P1 L) q我是成骨诱导21天后染的。我的染色过程有问题吗？

细胞海洋

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' H: Z$ T: D# r: I) V) h: K. b& B8 i- G( Y! c
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chichao0000

最近看到一篇文献上的成骨诱导，茜素红染色图，感觉和自己做的差距很大（这个图染的非常明显，而且时间短），不知各位战友有获得和这篇文献报道相似的图吗？

chichao0000

我认为是诱导的时间不够，形成钙结节后才能染出阳性结果，我做的大鼠脂肪干细胞诱导35天左右，有阳性结节出现，不是非常多。

细胞海洋

回复 jinggyf 的帖子1 m: M7 _+ R2 a! z' h
1 ?5 T; b, t3 {* B1 x: B' r
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jinggyf

回复 sydfxt 的帖子
5 \( e  o# C! O- ]* z5 _
% w5 _8 C5 B4 X: c* {/ e7 b请问一下，诱导没有成骨的原因有哪些呢？我用的是贝塔甘油磷酸钠、VC称量后放入离心管中，加入培养基溶解，过滤除菌，后再加入地塞米松和血清。
+ J: ]9 M1 H7 j% ]8 }1 e! ]; a0 I9 s0 B浓度分别为贝塔甘油磷酸钠10mM,VC 20mg/ml，地米10的-7mol/L，10%FBS

小猪快跑

回复 小熊不杀生 的帖子* e7 c* G% p3 P% b( p* s! {

: r4 r2 q* E; c  }麻烦问一下，成骨诱导多少天就能看见细胞聚集和黑色的钙结节啊？还有黑色的钙结节长成什么样子啊？有没有图片参观一下啊？

zxdlala

回复 luoziwei 的帖子2 E) S/ t$ O2 p9 O' g' P  j5 s/ O9 l

3 R! X# L  Q9 l& w我觉得应该是8啊，钙化结节里面碱性磷酸酶是阳性的

gact

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$ R, e9 E, d( c% a0 w: ]6 J! D  a, l5 Y+ ]
是茜素红-S？？
  |" p* w# h1 \' P8 V! M; A还是茜素红？？
' q# J' S6 Y! z' K% \2 L

gact

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5 e# }# x4 S' \$ j: B
4 w4 m7 P8 _' D/ s! J% Q4 u是茜素红-S？？
# s5 M+ x$ ^* W% K) ^' L( o( k  U2 f还是茜素红？？+ ^: z4 d: G) D3 h: N