如何将细胞单克隆挑下来

zoe

在培养皿中的贴壁细胞，如何将细胞单克隆挑下来？

starlancer

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6 `. |- G1 m" D; q稀释法或者显微操作，虽然后者有点杀鸡焉用牛刀的感觉。我能想到的是这两个，不知道还有啥别的方法

kostarcell

高压过的棉签蘸下来，把棉签放在50ml离心管，离心管放饭盒里去高压。我忘记棉签是不是蘸一点稀释的胰酶了…… 你自己试试吧

zoe

如果用克隆环呢，好操作吗？

yezi_830823

我觉的用克隆环不是很好操作，它总是漂起来，还不如用显微操作呢

zoe

显微镜下用枪头吸出来后直接吹散接种，还是要用胰酶吹散？

wxyWXY

用胰酶吹

大刀无敌

挑单克隆就是用白枪头挑的，然后胰酶消化。

qingbao

如果是带荧光标记的就很好挑（没有标记的就稍难一些），在显微镜下找到，在培养皿底部相应位置做上标记。至于用不用胰酶需要看具体细胞株而定，比如像293这样的细胞就不需要胰酶，其他贴壁牢的细胞则选用胰酶。

Temin

我们是这样做的，我觉得比较简单，但是较为考验操作技术，不过多挑几个培养皿，熟悉一下就能挑到很多的克隆。简单的来说，是这样的：首先转染后的细胞（或者其他细胞系）按照一定的比例稀释到100mm培养皿（比如1:50,1:100,具体根据那种细胞生长速度的快慢而定，保证之后长出的单克隆与单克隆之间有足够的间隙空间，方便挑克隆），加抗生素选择性培养，大概一周到两周（视细胞系而异）后能长出肉眼可见的细胞单克隆，不是很清晰，但在超净台中对着日光灯能看清楚的；这时准备挑克隆了，准备一块96孔板，加上100ul/well培养基；准备一盒灭菌后的200ul普通黄枪头（20ul的白枪头我试过不好用）；先吸掉培养皿里的培养基，用PBS润洗一遍细胞（要是熟练了挑克隆的速度比较快，我们也直接用胰酶润洗，另外对一些难消化的细胞，用胰酶润洗的效果比PBS好），再用100ul移液枪调到20-30ul量程，吸取大约10ul左右胰酶，在日光灯下对着细胞克隆吹打并吸取，加到96孔板中即可。" c$ b6 U* C* R
刚开始用这种方法，可能吸不上细胞，导致整个96-孔板可能基本上白板，没几个克隆被挑出，但多练习几次就可以了，基本上一吸一个准；不过，这种方法容易导致克隆不纯，这也是为什么之前克隆稀释的时候要按照一定的比例，保证克隆与克隆之间有足够的间隙；但是，还是不能保证克隆很纯，在鉴定出阳性克隆之后，如果觉得有必要，克隆到时候再做一个单克隆稀释。
, Z3 n& T1 K1 K% k( s6 G我们用这种方法很久了，觉得比较有效，已经成功构建了很多的细胞系。