求助关于肿瘤干细胞微球体的传代

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肿瘤细胞在无血清培养基中形成微球体之后，传代的时候要用胰酶-EDTA先消化，吹打形成单细胞悬液，然后离心，之后重悬分装吗？是这样做吗？" u0 M) B$ r4 H* a0 p' d; L$ L# O( ~8 K
大家都要用胰酶-EDTA消化吗？

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' ^  {+ o# e3 m0 g9 z4 `非常感谢深海寂寞鱼。

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# M! F/ i/ o, M$ j: a! i' {) ]
% i# p: B0 x+ T4 Z9 Q想请教深海寂寞鱼：培养细胞球用的细胞因子EGF、bFGF，你用的是什么公司的，是直接分装就可以用的，还是有干粉自己配制的，哪种比较合适啊？

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+ G' Q0 a1 M) ^9 E0 f' Q( J
) D$ u7 [* w8 v& p; y3 h( M7 q0 I请教深海寂寞鱼，一般的文献中无血清培养基都用的DMEM/F12，如果细胞本来的培养基是1640或者是DMEM，那还要更换培养基或者直接在原来用的那种培养基中添加细胞因子啊？

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2 {% v/ v0 I0 K6 s8 x! ^谢谢，再问关于B27添加剂的问题，invitrogen公司网站上介绍的这个是神经干细胞培养基添加剂，可是有些不是神经肿瘤细胞的无血清悬浮培养也加了，当然还有一些没加，好像都能成球。这个加和不加有什么大差别吗？

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4 T( A3 A+ _, Z' a/ D+ u# P深海寂寞鱼，想请教一下问题，你用来稀释细胞因子的BSA是哪种的啊，我在网上查，怎么那么多种啊，头大的 很呢。帮忙啊，急。

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/ \! i/ A7 D6 {4 V' v请问悬浮生长肿瘤球要怎么换液啊，培养三天了差不多可以换液了吧？是半定量换液呢还是低速离心后重悬呢？半定量要先静置多久啊，怎样避免损失细胞啊？低速离心的话要什么样的转速多久啊？低速离心后再吹打的时候是球还是单细胞了啊？问题比较笨，经验丰富的前辈指点一下吧！谢谢！！！！

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9 h! L! s, F9 w! |2 E% B3 H0 w
) \# I1 n( q3 d- {9 p谢谢指教！！今天我看了板子，细胞虽然都是成团的，但是都是贴在壁上的，摇晃板子细胞球根本就不动，不是悬浮在培养基了的，好郁闷啊！这是怎么回事啊？

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* G3 l- T# u8 U; E+ P) n! L; |" A
/ ]) x1 m; ~. r; ^) B8 ~3 W& Y深海寂寞鱼，你好，能否告诉你的邮箱或QQ啊？我一直在论坛问你问题，一直在帮助解决问题，非常感谢。我学校这边没人在做干细胞培养，苦于没人交流。谢谢！静候。- ?- A5 i. j& X2 U" Y) D7 V# O
因为权限不够，不能加你为好友，不能打招呼，发信息。

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: f) \8 q) k* \0 d7 \4 m好的，深海寂寞鱼兄。