乳腺癌细胞原代培养

fxy805

最近，一直在养乳腺癌原代细胞，可是发现细胞增殖速度很慢，不知道是什么原因。
7 m6 J/ B+ q: u4 h/ b9 E培养条件是：DMEM-F12,10ng/mlEGF和10ng/mlFGF,2%B27。期间因为细胞生长缓慢试过含10%血清的培养基，效果也不好。不知有人知道问题的症结在哪不，不胜感激！！

深海寂寞鱼

to fxy805:
; W/ o& w! u$ p- b1 |  L- @( u7 T8 h/ I( O; u
    从你的培养基来看，你可能是想从乳腺癌组织中分离培养乳腺癌干细胞，形成肿瘤球。8 R+ [5 f: ?3 r- p0 S1 C) r% [

' |4 Y1 K2 ?: y8 N    如果是这样的话，乳腺癌原代培养确实长的比较慢。尤其是前几代，两周多能传一次代都算不错了。3 V6 y9 H$ J2 G" l

- B: q9 Q2 a9 `  d. N3 E% T" `    如果你希望它能长的快点，有几方面可以考虑：. l5 H  v4 U8 C7 ?7 O

+ ~, s9 s& H- y    1. 稍微提高EGF和bFGF的浓度至20ng/ml，或者每三天加入适量的EGF和bFGF。
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# F+ g& |5 W. w9 t  p/ }    2. 保持足够的细胞密度，细胞密度过低也会使原代细胞生长缓慢。$ T8 Q0 O( z: v
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    3. 原代取材至培养的过程中，注意保持细胞的活性。（比如：保持低温，尽快培养，适度消化，等等）5 y" g$ p) s9 {6 R
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    以上仅是个人经验，你可以试试看，有问题可以再交流。
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    还有，我不是太明白你为什么要尝试加入10%血清？ 因为这样会使细胞贴壁，并诱导分化。
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    也就失去了你最初的意义。9 u7 }( T/ ]* U3 k- Z, U) s/ a
/ Q6 g: U6 a/ A2 G
    不知道你有什么想法？

fxy805

谢谢！！！
+ ^0 ^& W: o' j* i+ k1 `# \0 _当初选择使用血清是为了使细胞扩增，结果发现效果不佳。0 t# W: i- R, Y' C
现在还在摸索条件。
" l& }8 D- K$ }+ K) x不知道你的QQ号是多少，还有问题请教啊！！！

深海寂寞鱼

不知道海洋版主是什么意见？5 N* {0 |. _) t, S* h  t
如果海洋不反对的话，我可以把QQ号码给你。。
9 C! `, M, x0 v其实在这里交流可以让更多的人看到，大家集思广益可能对你更有帮助。

细胞海洋

回复 深海寂寞鱼 的帖子
$ X1 o8 C, `( M
3 D3 u& v5 k# D- G, r8 F不建议公开自己qq号码/ |9 P0 n8 ]9 V6 N+ e9 S1 z: }
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有问题在论坛讨论 更多人可以看到 也可以帮助更多的人
4 x! e) {- X* r1 g. p; ]& N, L7 ~5 R5 p& }
另外 公开自己的联系方式 很容易被不相关专业的人员骚扰

zjkenan

我最近在养乳腺癌的原代，长得好慢好慢啊，我是12月9号做的，现在还没长满呢，我是用的1640和胎牛血清，是不是因为我用的是1640呢，所以细胞长的慢

yezi_830823

如果是原代培养的细胞，是长的比较慢但是长起来以后就快了。如果细胞一直长的很慢建议你在培养基里加一些ITS，不要加血清。祝实验顺利

luoziwei

回复 zjkenan 的帖子: @. X* K# O; I6 K/ {

' }+ g- Y  m+ m, ~/ N! m1640培养基很好的呀，我们实验室就用这个来做癌细胞的

zjkenan

回复 luoziwei 的帖子
$ N: d  C# I0 O' O& `/ Z" E7 D+ z$ i- K" o5 f- Y- ^
哎5 o- X5 m, j9 c
我现在得了3T3恐惧症了
/ P( c9 j5 K; W: X老板让挑克隆到3T3上
; O* n4 Z4 b2 k; w后来那个细胞就长得飞快* X( u, S( H2 G! d
我总觉得那个不是癌细胞' b% H/ r( A! K1 c
怎么看怎么像3T3
% ?9 q3 R: I5 {* q6 ?+ u) A可是我的3T3已经用丝裂霉素10ug/ml处理了3小时了
- ?! |) X& T9 b7 t% W郁闷啊