乳腺癌细胞原代培养

fxy805

最近，一直在养乳腺癌原代细胞，可是发现细胞增殖速度很慢，不知道是什么原因。
8 z6 l' T! j$ q2 t6 Y6 Z培养条件是：DMEM-F12,10ng/mlEGF和10ng/mlFGF,2%B27。期间因为细胞生长缓慢试过含10%血清的培养基，效果也不好。不知有人知道问题的症结在哪不，不胜感激！！

深海寂寞鱼

to fxy805:
4 O: [( I# b  n1 W5 l
( ^" ?0 B/ H7 y9 V6 h( p1 m    从你的培养基来看，你可能是想从乳腺癌组织中分离培养乳腺癌干细胞，形成肿瘤球。' T8 u# |' i6 h& v8 q- d% S! Z

, p( R3 I! N# D& n6 R" V2 q    如果是这样的话，乳腺癌原代培养确实长的比较慢。尤其是前几代，两周多能传一次代都算不错了。
- H# v8 X. V, H7 n+ p5 ^. ^+ p3 E/ [* f: D9 m+ {
    如果你希望它能长的快点，有几方面可以考虑：* V# Y0 p5 T3 Z# V

% m) u' M5 j2 m: f# k2 O2 z    1. 稍微提高EGF和bFGF的浓度至20ng/ml，或者每三天加入适量的EGF和bFGF。6 \& J3 M/ B1 {! A0 x# Y! S9 ~. {; H

! c3 }( \4 a6 i! A% @% H    2. 保持足够的细胞密度，细胞密度过低也会使原代细胞生长缓慢。
% ]- @4 \( Z( Z2 L  N
& @, z/ B+ ^6 d    3. 原代取材至培养的过程中，注意保持细胞的活性。（比如：保持低温，尽快培养，适度消化，等等）
5 ~6 F; \( B( B  N' l- o
( s% H. G4 P; r: F( a    以上仅是个人经验，你可以试试看，有问题可以再交流。. ?# D* c9 P" e2 G: I

8 T/ Q- R1 g3 S# o    还有，我不是太明白你为什么要尝试加入10%血清？ 因为这样会使细胞贴壁，并诱导分化。8 ^* Y' W# k0 E/ O3 p2 D2 \7 X; z
! g  Z% }# P5 z1 ]
    也就失去了你最初的意义。
! G" `0 m$ c/ N* s) M. |; I* d! z8 `8 E: r- b  c
    不知道你有什么想法？

fxy805

谢谢！！！* g+ g) d8 K" M- U8 B0 G* d
当初选择使用血清是为了使细胞扩增，结果发现效果不佳。& g7 U3 c+ Z5 |
现在还在摸索条件。6 {9 H, N9 ~- Y1 V' o7 q0 D
不知道你的QQ号是多少，还有问题请教啊！！！

深海寂寞鱼

不知道海洋版主是什么意见？
, y) B8 G8 ]& P7 U5 ]! k2 {如果海洋不反对的话，我可以把QQ号码给你。。7 J$ \) i5 F- v
其实在这里交流可以让更多的人看到，大家集思广益可能对你更有帮助。

细胞海洋

回复 深海寂寞鱼 的帖子2 |& w7 T  K) K5 P4 d( W

! N# o7 }$ ]8 P: A& j$ Y' X不建议公开自己qq号码
9 m/ o  R. e( |( o1 R8 c+ }9 d
2 G  |3 o" \* m" q/ n有问题在论坛讨论 更多人可以看到 也可以帮助更多的人) R5 W! L. c/ _7 A) t

9 |# M2 j6 t$ D另外 公开自己的联系方式 很容易被不相关专业的人员骚扰

zjkenan

我最近在养乳腺癌的原代，长得好慢好慢啊，我是12月9号做的，现在还没长满呢，我是用的1640和胎牛血清，是不是因为我用的是1640呢，所以细胞长的慢

yezi_830823

如果是原代培养的细胞，是长的比较慢但是长起来以后就快了。如果细胞一直长的很慢建议你在培养基里加一些ITS，不要加血清。祝实验顺利

luoziwei

回复 zjkenan 的帖子( h# R5 W. e) b( v8 a" M; `/ @

$ A* F' O9 }+ \; L  A+ x1640培养基很好的呀，我们实验室就用这个来做癌细胞的

zjkenan

回复 luoziwei 的帖子
/ X+ V1 j3 r3 a1 D
, ^8 x8 o; u0 _* E! T5 y哎7 {3 R  p2 e' A
我现在得了3T3恐惧症了
; c. W' I+ d2 y, K. j& Z. s1 V8 V老板让挑克隆到3T3上& L: S* D' c7 K( Q6 A
后来那个细胞就长得飞快
% C3 v0 d/ R+ Z/ _2 S+ B2 H我总觉得那个不是癌细胞; Q5 d. E' P5 N, e" Q, U, `
怎么看怎么像3T30 L0 ^  V( u5 M, p* y# U
可是我的3T3已经用丝裂霉素10ug/ml处理了3小时了  A& X- M2 e" K
郁闷啊