乳腺癌细胞原代培养

fxy805

最近，一直在养乳腺癌原代细胞，可是发现细胞增殖速度很慢，不知道是什么原因。
' G: W7 P% f+ z! _9 n/ I6 N培养条件是：DMEM-F12,10ng/mlEGF和10ng/mlFGF,2%B27。期间因为细胞生长缓慢试过含10%血清的培养基，效果也不好。不知有人知道问题的症结在哪不，不胜感激！！

深海寂寞鱼

to fxy805:
) I8 @5 |8 ^1 a( ?
8 v) @0 K0 @7 [# U    从你的培养基来看，你可能是想从乳腺癌组织中分离培养乳腺癌干细胞，形成肿瘤球。5 e% a/ T- B  [2 C& [0 ^
2 L7 I' {& V4 D' H
    如果是这样的话，乳腺癌原代培养确实长的比较慢。尤其是前几代，两周多能传一次代都算不错了。6 B7 ^8 y$ @* \2 ~" C: A
" E; f. Y6 P9 I6 ^7 K. D
    如果你希望它能长的快点，有几方面可以考虑：: I+ ^1 V; x3 w* a! F- E$ |) H

! y3 _; t! p  T1 k4 l* b7 \9 ]+ `    1. 稍微提高EGF和bFGF的浓度至20ng/ml，或者每三天加入适量的EGF和bFGF。
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    2. 保持足够的细胞密度，细胞密度过低也会使原代细胞生长缓慢。# y+ {5 I2 H- Q' F7 J% K7 V7 r
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    3. 原代取材至培养的过程中，注意保持细胞的活性。（比如：保持低温，尽快培养，适度消化，等等）
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    以上仅是个人经验，你可以试试看，有问题可以再交流。
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    还有，我不是太明白你为什么要尝试加入10%血清？ 因为这样会使细胞贴壁，并诱导分化。9 v$ X6 F3 n( l- E
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    也就失去了你最初的意义。
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    不知道你有什么想法？

fxy805

谢谢！！！
4 L; ]- S  s  O% ]7 v当初选择使用血清是为了使细胞扩增，结果发现效果不佳。) l6 w# U' p0 w5 L- w* H" y; w, O
现在还在摸索条件。  M- ~. U$ ^5 Y5 [
不知道你的QQ号是多少，还有问题请教啊！！！

深海寂寞鱼

不知道海洋版主是什么意见？
( c3 n! w4 C; x' f* u, D$ Q如果海洋不反对的话，我可以把QQ号码给你。。- ^+ x. A4 x2 f. e. W9 L! I+ D/ U
其实在这里交流可以让更多的人看到，大家集思广益可能对你更有帮助。

细胞海洋

回复 深海寂寞鱼 的帖子  E( D8 [. q$ ~+ I) c
# w8 Q' Y% ~! K4 s0 j
不建议公开自己qq号码0 q& N7 k' C  ~, s6 G' N

: e" v- \- w3 C; O: R* l有问题在论坛讨论 更多人可以看到 也可以帮助更多的人! K% {& E' X) g: k' ^
/ t: A0 u* E# z
另外 公开自己的联系方式 很容易被不相关专业的人员骚扰

zjkenan

我最近在养乳腺癌的原代，长得好慢好慢啊，我是12月9号做的，现在还没长满呢，我是用的1640和胎牛血清，是不是因为我用的是1640呢，所以细胞长的慢

yezi_830823

如果是原代培养的细胞，是长的比较慢但是长起来以后就快了。如果细胞一直长的很慢建议你在培养基里加一些ITS，不要加血清。祝实验顺利

luoziwei

回复 zjkenan 的帖子3 l2 E: M) N  W- m4 s& f3 d6 W6 m' C

, Q' E5 s' I- G2 A1640培养基很好的呀，我们实验室就用这个来做癌细胞的

zjkenan

回复 luoziwei 的帖子% |) H  e' P0 X/ D) t/ d# v
6 d6 T$ O  y0 ^- M  z# C
哎  B( t3 u$ s% b1 C
我现在得了3T3恐惧症了) X7 D) c) b5 @" A% y
老板让挑克隆到3T3上3 K& i/ \/ Q& u; R" n
后来那个细胞就长得飞快- B: q8 R2 s/ B
我总觉得那个不是癌细胞
; p  k1 S# r0 m* n/ N9 r# g5 o5 Z' ~怎么看怎么像3T3
+ ]/ l( z! ^' c可是我的3T3已经用丝裂霉素10ug/ml处理了3小时了
4 ]( m0 H# b  Q- J" z& z8 w郁闷啊