新手求助：人骨髓造血干细胞获取、培养、鉴定方法及判断增值、分化能力的量化指标

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目的：抗贫血药物作用机制
! [+ H3 o* `2 ?/ G% C) Z" r+ g方法：通过人骨髓造血干细胞获取、培养、鉴定及判断增值、分化能力的量化指标，说明抗贫血药物的作用机制和靶点，实验分体内、体外两部分。
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& _; F1 P- m$ F" q% ]4 G希望有这方面经验和想法的朋友赐教、指导，感谢！

holly_g_v

一般都是用造血干细胞做集落，看你要采用什么方法鉴定药物了，体内还是体外？造血干细胞分离我们实验室用的是免疫磁珠，贵点，但是特异性高，就是费老鼠，分离出的细胞数量比较珍贵~

luomeiwuhen

谢谢楼上的骨髓间充质干细胞的培养方法，好全的，可否还请教一下，怎么养骨髓造血干细胞呀？谢谢了哦

catheryne

楼上获得的原代细胞是骨髓单个核细胞吧，造血干细胞应该是不贴壁的。造血干细胞有分化的潜能，因而要根据研究目的确定是添加细胞因子促进其向某个方向分化，还是抑制其分化，方法是完全不同的。

pei

大鼠MSCs的分离培养 断颈处死Wistar大鼠（6周龄），消毒皮肤后，于超净台上取其胫骨和股骨。剪去其两端骨骺，于10cm2培养皿内使用含10%胎牛血清的DMEM培养液冲洗骨髓腔，反复吹打使之形成单细胞悬液。加入含10%胎牛血清的DMEM培养液，接种于培培养瓶中。37℃, 5%CO2 培养，贴壁3天后换液；此后, 每周换液3 次。至原代（P0）长满后，用0.25%胰酶消化，按1：2传代，第5代（P5）用于实验。8 T/ l7 x! @% x' O" j
2.大鼠MSCs的表型鉴定 用0.25%胰酶消化收集MSCs，用培养液调节细胞浓度至1×105/ml。将细胞悬液加入置有盖玻片的6孔板中，48h后玻片取出，制成细胞爬片。4%多聚甲醛固定, PBS洗3次；0.1% Triton 室温处理5min；分别滴加FITC免疫荧光标记的小鼠抗大鼠CD29，CD90，CD45和SH-2，避光孵育1h；PBS洗涤, SH-2标记的细胞爬片加大鼠抗小鼠FITC 标记2 抗室温避光孵育1 h，PBS 洗涤；滴加50%甘油缓冲液后封片，荧光显微镜下观察有无FITC标记细胞。, I9 w. D# H! {& d( v1 y. ^9 @

luomeiwuhen

我也想知道，只是我只想知道前面的骨髓培养，