间充质干细胞复苏问题

xuehu20

间充质干细胞150cm2的瓶中培养，融合度90%时冻存的，冻存液为DMSO:血清=1：9，复苏时在37度水浴锅中融化成半冰半水状态，倒入预冷的DMEM培养基中1500转离心10min，胎盘蓝染色细胞存活率75%，可是培养一天换液后发现细胞全漂着，咋办啊？救命啊

文武庙

复苏时，我一般直接放入38-40度的水中让其完全融化，再加入10倍培养液清洗一次，1000rpm，5min,RT；移入培养瓶，加培养液培养，活率很高

amanda2011

我也遇到，过这种情况，复苏后细胞一直不贴壁，最后都死掉了，后来用培养基洗了两遍细胞去除DMSO，确实解决了问题。

amanda2011

我养的是人脐带间充质干细胞，复苏后也碰到不贴壁的情况，搞不清楚原因

kingchen81

10%的DMSO，10-20%的血清，DMEM-LG, 冻存
/ P5 ~9 l3 [1 {+ G一般短期的话成活率都会在90%以上。7 O7 h2 L3 f* d- l3 O. @
复苏的时候，最好用DMEM完全培养基洗涤一次，再种到培养瓶中比较好。

柏林小杨

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3 ?: C+ }" u: q2 C
5 \2 h& F. V, \6 m他用培养基洗了一次，应该DMSO的影响不大了吧？

joeandanna

细胞死了。而且细胞台盼兰染色剂是有毒性的吧

jinyiran

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# L6 G$ w* z% ^1 [) _; x6 n0 W* a3 W! s! u9 G% r7 Y% R
给细胞更换培养基是为了细胞的状态比较好，转入到离心管前一般在离心管中加入3-5ml的培养基就可以了，目的是为了稀释DMSO。

lgh1986

冻存细胞遵循一个慢动快溶的原则，不全溶成液体，细胞质内容易产生冰晶，可以致死细胞，稀释10倍是可以稀释DMSO，尽量的减少其对细胞的毒性作用，更换培养基是使细胞状态达到最佳

xuehu20

回复 lgh1986 的帖子! e, ^( u2 `$ d& J0 Q$ R
) L* s8 ?' n4 ~0 n- W
请问你们的常规方法是老师的经验之谈还是有理论依据啊，要是有理论依据的话，请问融化细胞时为什么要全化成液体，转到离心管离心时为什么要稀释10倍，还有冻存前一天为什么要更换培养基啊