间充质干细胞复苏问题

askage

复苏过，冻了将近1个月后。文献的配方，自己摸索的配方都尝试过，复苏后活率都还有90%+。而且也成功继续传代扩大培养，从106长到108，没问题。没出现楼主说的那么严重的问题

mbjane

我复苏过hUMSC,一般存活率比楼主的高，90%以上，复苏培养有时状态还行，有时状态较差，但是没出现过全漂起来的情况。
* G6 J& N3 T+ k8 ^你的培养基没有问题吗？

一一

从楼主说的看，全死的定义让我有些疑惑，是什么样的？你知道污染也会导致的。如果排除污染，可能性只有两种：第一，冻存的时候，出现问题，关键是DMSO在常温时对细胞毒性很大，放置太长不好，但是有90%血清，按道理讲不至于全部死亡。第二，复苏的时候，即使没有离心再洗一次，但是你第二天换液也是可以的，血清可以保护细胞免受DMSO的损害，我曾经也复苏过一次，第二天换液全部死掉，呈团状，当时没有理会，以为是解冻太慢，又复苏一次，没有全部死，但也差不多了。最后我发现我犯了一个低级错误，培养基里竟让没有血清，以后就再也没出现这类问题。我认为，即使解冻慢，也不至于全部死，所以楼主的全部死具体是什么概念？

农夫有点田

回复 xuehu20 的帖子% X# M# s4 t1 @) C0 m% M

+ L5 y; f) I: h( |9 h- [0 v9 f你这离心时都不见培养基洗一下啊 DMSO对细胞毒性很大的 知道么

tangyvhuang

xuehu20 发表于 2011-1-7 10:30
6 n' {, M1 b5 ?2 C间充质干细胞150cm2的瓶中培养，融合度90%时冻存的，冻存液为DMSO:血清=1：9，复苏时在37度水浴锅中融化成半 ...

( `# ^$ E' e* }我们是40度水浴融化的，直接融化为液体，加入大约五倍量的培养基里面离心收集细胞，水浴融化的时候一定要快，我通常是用止血钳夹住管口不停的摇晃使其快速融化，

deron

台盼蓝拒染只能证明细胞膜完整，也就是说，只要细胞膜完整，凋亡小体也可以拒染掉台盼蓝。几乎所有人养的MSC，复苏都不见起色。

xuehu20

回复 luoziwei 的帖子* Y9 W; X/ p5 n- d; n
' v( G4 B2 P  w' h
不是染色的细胞死了，是培养瓶中的全死了！惨啊

luoziwei

台盼蓝染色对细胞毒性大

luoziwei

台盼蓝染色还能有75%的成活率，第二天换液就漂了？你确定台盼蓝染色的结果是这样的？这个情况我们都没遇见过，难道是你把台盼蓝染色后的细胞再拿去继续培养？

luoziwei

台盼蓝染色还能有75%的成活率，第二天换液就漂了？你确定台盼蓝染色的结果是这样的？这个情况我们都没遇见过，难道是你把台盼蓝染色后的细胞再拿去继续培养？