关于油红O染色

Learner

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0 o& M7 D4 L& O) B  @: V, ?; s3 Q' n2 a# u  K
好像一般不用乙醇固定吧！

zgzjhzxyj

油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液,避光4度保存，用的时候油红O储液：蒸馏水=3：2的稀释。
# r5 ?0 h  I8 Q% E步骤
3 ~! `) d7 b6 M2 P$ O/ G) D1、固定：吸弃培养液后加入95%酒精固定30min或以上
) U1 W" s$ E5 k2、漂洗:吸弃固定液，PBS漂洗1次
4 C% o+ |( _! o2 G5 _) }3、染色：加油红O染液染色10-60min: M! `0 y' T2 u! J- s# ]
4、漂洗：吸弃染液，PBS漂洗3次，尽量把背景洗干净，避免色素沉着9 Y; B0 r8 T; i: g: J- f. ?% ^% P
5、拍照记录8 e& R" f- C; M  ~) Z! m- E
# b% Y+ ?( N) ~/ g
注意：所有操作都需轻柔，脂肪细胞比较容易破裂，脂滴外溢4 S+ W* ^4 m! @5 {) W3 I

; R. @! {& t8 K2 [0 H$ l. J" g附图：5 I% n) W. Z1 i" N, A! ~

why121

最近也在做这方面的染色 根据成品说明书是用4%的多聚甲醛固定30min 然后PBS洗后 用3:2稀释的油红染色 但本实验室的显微镜不好 照的相感觉很差 想请教下你们用的是倒置显微镜多少倍还是用一般的光镜呢

gqs2872022

1.染色的工作液现配现用，不宜久置。& k' \# |  J$ [
2.建议过滤工作液，能减少杂质使染色变得更好看。
% Y+ `& j9 d% r. z3.染色前需加60%异丙醇5min。
9 S/ }5 w/ b; X4.染色时间15~20min。
* R6 s1 _9 s( M- R# }7 I5 T; @5.水洗，60%异丙醇分色，时间要恰当，不宜过久，过久估计全部都会掉。
2 }5 X) `9 M( q2 T9 r6.苏木素复染可要可不要。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。
' m& j7 f9 `) {: ^2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。2 g- u' X' k& G2 ?5 v
3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。- r! ^0 z5 ^9 e/ W/ ^# ~
4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。
; g9 q9 k* e$ R4 U: w/ A5 D

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,# c. Y! t7 {* m3 p6 r
我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野., s3 Q' A+ T6 q4 E& P+ S
另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,
- @2 Z9 z, j$ ^4 U  Y% P还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

glysh

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7 }, |3 E7 O, x8 `3 |$ e5 H很有可能是空泡！

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤
, C8 Z1 S4 |7 [5 D* @" h油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释+ J5 N3 K3 T7 e+ b' m. K
脂肪细胞的油滴很明显的
: Z- h& \- A; l# }- d  u1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
& e: ^! \; [8 ^4 Z4 ~/ l# ^2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。3 @& g! w$ X. }& I
3，60%乙醇分色，
* ~  O4 x4 i, l) z4 I4，苏木晶复染
/ C+ l: f2 D- c4 d0 M2 ~5，水冲洗至变蓝。+ N9 Z: m5 f8 A% O$ {6 \