关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。" \3 e* K6 k8 c& _/ y+ c
第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；. o6 M# T3 D) D  n; E
第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。
. R; k3 f' a, l1 s. \& Q即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤' H4 d7 a2 u, D! \& J7 d0 d+ P
油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释
  ?( b) p  ~' O6 [/ V5 E8 Y脂肪细胞的油滴很明显的" z6 R1 p' B8 x. k+ ~8 M5 x/ N
1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
" Y" c7 Z, U' @2 {% l  H! X2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。. @4 B2 Z7 D' p
3，60%乙醇分色，
7 V* v% k, V: ?/ D3 K$ m4，苏木晶复染
8 X3 y7 i/ V: ?5 a$ r5，水冲洗至变蓝。" O9 P( O: U- o4 m. V

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

回复 feiyang 的帖子: q$ _( k# s8 i
. p) x. g# W# N& A0 f4 W
很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,
# r7 v5 `$ n# L2 R6 v我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.
# X' d8 Z# T0 v6 m3 y2 s" Y. N/ a另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,5 [  C. x5 W) c" l
还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。$ F0 z* `7 J- C0 k, x
2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。
) Z& M: s' I$ K) @0 V# N, T3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。
1 N" i2 Y1 ^0 `1 _4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。# O. C# y; J7 c3 C