关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。2 i+ w" z6 n2 P% N0 m- B2 W
第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；5 I- X7 Q' [$ y- _' S
第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。$ H. f" ^# T' C" ?* p. z6 ]
即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤
, W6 d% _7 o! y$ F! c6 r油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释
% P9 T9 g( D& r7 J, e脂肪细胞的油滴很明显的) ]; a) p/ u! R  i& f4 L0 D4 w
1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
, h9 P; b1 b9 {, T; [2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。6 T3 S0 d3 _/ p
3，60%乙醇分色，
, o9 ~& \+ o4 C. i! U* A2 x4，苏木晶复染/ J% J: S  L$ @" s. g; A
5，水冲洗至变蓝。
% a8 V4 d# N+ ?/ }+ ~

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

回复 feiyang 的帖子$ m5 L5 y. g4 z
9 k: k" T4 I' l4 V, `' {( c
很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,
3 D& r( i" D5 U6 R; J8 T( \# |我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.' N; k4 }/ N6 ]
另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,2 Y. U1 r$ ]6 ~3 H4 C. L
还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。
' ?  G* a  J% g8 H+ i2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。- F6 [% S2 D2 G9 X
3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。* n% @9 V4 ]+ c5 y+ @1 |6 _, ?4 D
4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。) o1 D6 [- u0 {