RNA保存

Sophia

请问，RNA在负80度下，能保存多长时间呀？谢谢！

xiao6tao

用什么装的怎么保存？

siyue13

如果是抽提好的RNA，建议不要保存，赶紧反转录成cDNA比较保险。2 r" b2 Q! ~4 \5 W
如果一定要保存RNA，请加入1/20体积的RNA保护剂（RNase inhibitor）,60摄氏度处理20分钟使可能污染的RNase失活。然后可以放入冰箱短期保存。% s) |7 l% I9 Q4 Y- c9 X
如果是组织样本保存，一定加入样本保存液。比如Qiagen的RNAlater或者Tiangen的RNAstore。把样本切成小块浸泡在溶液中过夜，浸透之后再放入冰箱可长期保存。

luoziwei

1个月没问题

qingbao

最好反转录成cDNA，cDNA放在-80度几个月一般都没什么问题。如果实在要保存RNA,那就注意防止RNase酶对它的降解。其实不光是保存，只要涉及到RNA的实验过程都要注意。RNase酶广泛存在且稳定，外源性的RNA酶主要存在于操作人员的手汗、唾液等，也可存在于灰尘中，可以说无处不在。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成交叉污染。. ]8 G4 \- a9 r1 Y5 I& Z, P7 B
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在RNA试验中防止RNase酶污染的措施：2 \$ z, z- A4 A7 x  ^% o
1.有条件的话，最好要有独立的RNA操作专用区域，移液器等应为专用。9 b: F  z( U2 |! r, @6 n, Y
2.操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。
% h4 K4 ]4 @& S2 p" Y3.玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。, |/ q; j3 ]% M4 E8 t1 Y6 d" Z
3.塑料制品可用0.1% DEPC水浸泡过夜。
. X0 o& i* d4 w6 m1 v* |4.配制溶液用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。
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' E  C- F3 c/ m2 e当然，要是实验室条件好的话，EP管之类的现在都有现成卖无RNase酶的，就是人家处理过的，这是比较偷懒快捷的方法。5 ]) k! R' {7 o0 M2 w" e: Y

, w9 Q# t+ |& R) c顺便提醒一下， 焦磷酸二乙酯（DEPC）是一种蛋白质变质剂，为可疑的致癌剂，操作要在通风柜中进行。
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nydfy

如果不急着用可以沉淀于70%乙醇，-80°保存一年应该没问题！

Sophia

谢谢大家！4 M9 }: ~4 l' H) L: ]: A

chleiwu

-80度一年没问题，-20度2各月内我用来反转也没问题

chleiwu

Trizol Reagent 061207.pdf (108.5 KB)

2011-1-24 21:52 上传

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RNA
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After homogenization and before addition of chloroform, samples can be stored at -60 to 8 C7 k) e! Q3 {2 s- f
-70°C for at least one month. The RNA precipitate (step 4, RNA WASH) can be stored in
! ]& ^. r& H; F8 T2 }1 u75% ethanol at 2 to 8°C for at least one week, or at least one year at –5 to -20°C.

tangyvhuang

如果是溶在depc水中的话，rna本身的质量很好的话﹣80保存一年是没有问题的，这个我试过。如果质量一般保存一两个月也没问题* r! O8 _& [& G/ x* ]3 v! g
如果是溶在甲酰胺中的话，rna本身的质量很好的话﹣80保存几年是没有问题的，如果质量一般的话保存一年也差不多