绵羊脐带间充质干细胞，让我郁闷的无文献摸索

皮搋子

- S! ], E2 b& g0 {. f9 d" k
( s/ c  R3 [. z" \. O0 _0 l小弟开始做绵羊的脐带间充质干细胞了！
  ^% Q. p5 o! u. \9 h# h) z& C  h( _6 F  ~6 h8 I- d: w& F2 c& e. ~" A5 F
话说这绵羊的脐带和人的还真是不一样啊，人的脐带是一个手指头粗的管子，而绵羊是那种透明的黏黏的软胶包裹着4个管子。刚开始的时候没经验，第一根我就按照人脐带的处理办法把上面的粘液弄的干干净净，然后消化了之后我悲催的发现，啥都木有。。。
$ H9 M9 k5 }% S4 l& n' m3 d$ A$ m; q
4 _0 e6 O1 u) ^% g2 E第二回老实了，把那个黏黏的东西留着，据同事估计，这玩意就是华通胶（Wharton’s jelly），一次做了2根脐带。
2 y8 ~; P4 H8 X6 H2 D
: A- J/ g: g* m5 m, O; g- C4 b有一根脐带特别争气，别的细胞还在稀稀拉拉的长的时候，它5天就长满了一瓶子，175cm的大瓶子啊！！！！真给力！！！形态还特别好！！！
: Q8 {1 n0 |9 g( a4 k
2 S* H4 E2 V! L5 ]" f3 {1 j" ?: O它还长成了2层，没说的，直接1传10；5 r8 r, y6 a% U5 _, a, x

+ a3 i6 N" B  _- ~' y5 y消化的时候问题来了，上面那层胰酶3分钟就消化下来了，可是下面那层却是纹丝不动。两层细胞长的一模一样，我犯难了。
! C) F$ Y( o7 a: l- G# j) P* u
: W9 m/ q# n. y1 k3 C不管了，先把上面的细胞给分瓶了再说。* f$ m" l5 ^+ ]1 T: ~" D

* J6 c5 r0 e& O# p) K回头再看瓶底的细胞，胰酶浓度0.25%直接上原液。10分钟后，终于下来了，现在我彻底傻眼了，到底上面的是绵羊的Msc还是下面的是？？？？% _2 G, q0 Z( h

+ Z. h( f/ u* P我把下面这层也放起来培养着。。。: B* D/ @9 z4 a* s2 [

* E$ E1 c! f. ^/ o% i1 ?% J/ I目前寻找鉴定方法，因为我们没有流式细胞仪。不要劝我查文献，做绵羊脐带干细胞的小弟是第一人。9 p  J+ G7 R, u/ b
3 P4 ?& Q- _! _
就算是做表型鉴定，请问绵羊的脐带间充质干细胞哪些表达，哪些不表达？
+ ?5 b  @9 I. A. z  y
7 p! t7 X* r, V  l/ @0 U- o# p好吧，上图吧。图片有点多，请耐心等待。
' }" \/ a& M% N4 a% v8 d+ F& V) F# h
背景亮的是传代后的。7 r: ~) n1 p5 O

6 Z# o3 e8 A9 ?: J& @

皮搋子

回复 皮搋子 的帖子+ I7 m6 z* f* o9 @2 R) q( _! S

  V. j% N) O5 L6 c我会将做的时候遇到的事情一点点的写出来，给有像我这样误入歧途的同学提个醒：细胞是万恶的，干细胞是万恶中的万恶！
* H, S& H, [' \- ]: {5 N4 l
% x, _8 s5 C  C7 Y比如那个脐带问题，人的是大约直径8-10mm的厚壁管子，按照教科书的办法就是把血管剥离下来，然后把组织给剪碎了消化。7 a0 c/ P1 ~3 i

/ r6 H" b6 j& q看到绵阳的我傻眼了，4根粗细大约有3mm的白色管子，上面裹着1mm厚的和果冻差不多的东西，用辅料镊一噜就干干净净，下面剩的东西酷似血管，你说我该怎么办？？？撕开？别扯了，这么细的玩意。) Q1 e( E9 z9 v; ?1 c

8 e; {8 G' e9 y% I. K没办法，我直接给剪成碎片消化了，后来养细胞的时候细胞分成两层，下面那层难消化的我估计就是这个原因。; `  z8 N" _+ L/ d

: r. y4 M+ ]2 b9 A什么原因呢？别人做的时候是挑去血管，而我这由于不能肯定那个是什么玩意，所以直接消化，导致血管的内皮细胞上皮细胞什么的全部下来了，下面那层难消化的就是这个东西。这是我的推测啊。/ x8 ]3 f6 ]9 h2 T" I8 Y

1 P7 p4 `: p+ A3 X. X# z0 U唉，焦虑啊，一个问题接一个问题的。5 |$ s+ S. ]% A  q# _( z" n  L' R

7 |9 I1 r3 x+ ]  N1 p3 b( X明天我会出续集，讲讲下面我遇到的问题和我更大的焦虑。

皮搋子

谢谢各位，我准备开始做诱导分化了。

皮搋子

回复 get0715 的帖子
+ g. s/ k: o- T( V3 \5 s6 B6 i( f0 O) V& K
第5天就长的密密麻麻分成了2层。

皮搋子

回复 hanbing 的帖子
3 \* T/ T; Q7 M( W
: s9 S" W8 t% ]/ E. L请问你也是养的绵羊间充质？能加qq交流嘛？