请问MSC从梭形变化到扁平状是分化了还是老化了？怎样让其长期保持在梭形状态？

boo1019

请问MSC从梭形变化到扁平状是分化了还是老化了？怎样让其长期保持在梭形状态？为什么原代细胞就会变扁平，会是什么原因引起的呢？

一一

培养体系应该始终如一，不能换液时不加，培养加。消化是否离心，是根据你加的胰酶量，还有是否含EDTA，如果加的胰酶量比较大如1 ml左右，还有EDTA，我建议还是要离得，如果细胞比较娇贵，那就低转速，时间可稍微延长，我们都是 1000 rpm/min ，5 min。比如你的消化下来液体比较多，也就是在离心管里液面较高，就应适当加长时间，而减小转速。

一一

干细胞老化表现：
; D* o# D- @+ Z9 g& `①细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化；
8 ^, p- M; L$ L0 c6 o②细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）；) q% ~! |. Q0 M2 y; U+ p
③细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样；
% x0 f( F! q1 h+ V) L* v④贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞；4 u2 M5 B; G% N; P2 K2 c+ q
⑤部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏；* x# G, w: G- }7 ?
⑥细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。% X% v# g; u; B
预防：  Y9 I3 ^4 b$ F4 g; w" k2 w
①合适的接种密度，有些细胞需要一定的接触，通过分泌因子，进行增殖，当过于稀疏，增殖会缓慢，出现老化；+ W" z4 d& ^5 A3 e$ z4 N8 _
②传代汇合度：过晚传代，细胞出现接触抑制，活力下降，贴壁慢，增殖慢，出现老化；; r) a% L) G4 g: {+ i9 D' @  C
③合适的血清和培养基，这个就不用说了吧
2 Y9 \! Y/ Y# k1 T8 ?& A6 E④必要的因子：如bFGF，保持梭形，还有抗氧化的物质 如维C；# P; H9 \6 N- M1 E3 A4 Z
一旦细胞增殖慢，就会容易出现老化，一个细胞的老化会分泌很多东西对其生长环境影响，导致出现老化现象。; Q# [/ W! _. k3 ^$ [$ o2 p
7 ^( ^1 W: T+ x' F8 A

daviehe

大家传代消化细胞后不离心直接培养吗？困惑！

yunshi503

看来 复制性衰老是个大问题 对干细胞的体外培养

fengxuan

回复 boo1019 的帖子
* S4 Q" B" f2 `4 |3 j/ V5 E1 e7 W/ z  l+ @, m/ ]
你养的MSC 第几代开始变得？

寒小溪

不好意思没说清楚   加的是因子   原代加传代换液也加  原代没加 传代换液也不加哈

寒小溪

我的也是  传代的没有原代梭了  1 我觉得不要给予刺激很重要   原代条件怎么样就怎么样  换液传代条件都不要变化   比如原代没加那传代以后也不要加了   刚开始用什么瓶子以后还用什么瓶子    总之  前后给予同样的条件   2传代消化很重要   时间五分钟不要太长 不要离心3 U# P6 ]$ @" ?0 p9 w

2 U( c6 s  E3 b4 s9 q/ v6 b% p
- a! @, y$ B; o+ I0 [3 g- s
1 w1 @2 f! s6 j. K: g

xiao6tao

同意楼上但是：MSC其实是生活在一个低氧的微环境,1%-7%左右，这个浓度和常压下相比，低氧可以延缓其衰老，延长寿命。
# Q3 t( h* W9 t- R" ]我们一般在常压下培养MSC，所以会出现过早衰老，甚至发生转化。

open1230

最初时是纺锤形的，但随着传代次数增多，细胞渐渐变得不规则！