请问MSC从梭形变化到扁平状是分化了还是老化了？怎样让其长期保持在梭形状态？

boo1019

请问MSC从梭形变化到扁平状是分化了还是老化了？怎样让其长期保持在梭形状态？为什么原代细胞就会变扁平，会是什么原因引起的呢？

一一

培养体系应该始终如一，不能换液时不加，培养加。消化是否离心，是根据你加的胰酶量，还有是否含EDTA，如果加的胰酶量比较大如1 ml左右，还有EDTA，我建议还是要离得，如果细胞比较娇贵，那就低转速，时间可稍微延长，我们都是 1000 rpm/min ，5 min。比如你的消化下来液体比较多，也就是在离心管里液面较高，就应适当加长时间，而减小转速。

一一

干细胞老化表现：2 A3 {- p4 l5 p
①细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化；) t8 g) ?5 R0 H) K
②细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）；
# D6 u- H8 _# P③细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样；
4 s& D2 ~) _; E6 O( F④贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞；
7 y) v; r- F6 N' s⑤部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏；
& g- K; T* z( P, k! B⑥细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。
4 B" q3 }- e7 [" ^预防：- N* O' q  o0 R4 a
①合适的接种密度，有些细胞需要一定的接触，通过分泌因子，进行增殖，当过于稀疏，增殖会缓慢，出现老化；1 P8 i. l" n  F' \
②传代汇合度：过晚传代，细胞出现接触抑制，活力下降，贴壁慢，增殖慢，出现老化；
  P8 b2 [  N% U* X- `+ R! w# {③合适的血清和培养基，这个就不用说了吧
' D& J7 _9 H; Z5 e3 J④必要的因子：如bFGF，保持梭形，还有抗氧化的物质 如维C；5 G, t" M& H7 |* X' u) q; `, V
一旦细胞增殖慢，就会容易出现老化，一个细胞的老化会分泌很多东西对其生长环境影响，导致出现老化现象。
& `. x( h6 M/ V( `$ x, [7 L9 i% A; X+ g

daviehe

大家传代消化细胞后不离心直接培养吗？困惑！

yunshi503

看来 复制性衰老是个大问题 对干细胞的体外培养

fengxuan

回复 boo1019 的帖子
9 L; f* p5 I# I8 q8 s# [2 ^8 ^! X# j/ K/ {- X, F2 Z+ Z
你养的MSC 第几代开始变得？

寒小溪

不好意思没说清楚   加的是因子   原代加传代换液也加  原代没加 传代换液也不加哈

寒小溪

我的也是  传代的没有原代梭了  1 我觉得不要给予刺激很重要   原代条件怎么样就怎么样  换液传代条件都不要变化   比如原代没加那传代以后也不要加了   刚开始用什么瓶子以后还用什么瓶子    总之  前后给予同样的条件   2传代消化很重要   时间五分钟不要太长 不要离心
! u! i$ T5 B+ t  V3 e, {2 y2 K7 L4 K! U" j- d/ e: G

1 Y3 e1 M: d# I* Z" i# s' d7 x; s# a9 ]

xiao6tao

同意楼上但是：MSC其实是生活在一个低氧的微环境,1%-7%左右，这个浓度和常压下相比，低氧可以延缓其衰老，延长寿命。8 w  x* N4 x5 c% S
我们一般在常压下培养MSC，所以会出现过早衰老，甚至发生转化。

open1230

最初时是纺锤形的，但随着传代次数增多，细胞渐渐变得不规则！