斑马鱼胚胎显微注射（QT格式）

珊野love

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! y% G; g7 C6 f. w3 L& H非常感谢，我们用的就是专门显微注射的显微镜，我不知道是不是体式的，老师说找不到动物极，因为培养皿中没有谁，没法漂浮。我原来在上海那边，那边有好多同学，不过现在来哈尔滨啦，嘿嘿，离你们好远呀~~

ying

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5 Y+ ?- ]( M$ z话说，你是用的体视显微镜操作么？体视显微镜下面看，是一定可以看到的啊。卵再小，倍数调高了也是很大很大的啊。不用体视显微镜估计没人能注射到动物极吧～+ F# Y4 g# ^- z* [  d
琼脂糖板子是有个专门的模具，模具扣到琼脂糖上面，凝固之后就成了几排槽子了。你是上海的吗？是的话我的可以借你先用。
7 ]1 c9 M2 A. |9 z: q& }我也不知道拉针是用什么程序。你可以询问一下清华（？）的孟安民组或者神经所的杜久林组，或者生化所的李逸平组，他们的程序是怎么设置的。你也可以按照各种程序都试试，然后选一个好用的嘛。

珊野love

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+ |* k8 \% o% d4 h% \注射针我们也是用拉针仪拉的，里面也有好多程序，但是不知道哪个好，有的特别细都打不出来液体~~

珊野love

非常谢谢，我是做转基因的，第一批检测结果就是没有转进去，当时因为找不到动物极就直接扎到卵黄中间的位置了，因为放在培养皿上没有水，卵还很小，所以看不到动物极，你说的琼脂糖的那个孔是胶孔还是有特殊的专门显微注射的那种啊~~

ying

回复 珊野love 的帖子5 i5 @4 |8 O* r9 A. f
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注射mRNA一般可以打400-800pg每个卵，注射morpholino一般是4ng-8ng。多了会有非特异性的表型。

ying

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我一般打1-2nL.   注射针我们是在鱼房做的，他们有个拉针的机器，我不知道他们怎么设置的参数。针也有不同类型的，你是要打算自己买自己手工拉吗？- n+ K$ Z2 B3 c* c% k" g( l" X
我打动物极的方法是，先把鱼卵在琼脂板上（那种特制的带有凹槽的那种，你知道的）排好，然后用个拉过的枪头（火烧一下，化了之后一拉，拉成不粗不细的一根丝丝）一个一个拨，拨得动物极朝上。然后再打的。之所以要用拉过的枪头来拨，是因为比较软不容易刺穿卵，又比较长容易操控。
) H3 q( \2 S. x8 R话说，你如果不是做转基因鱼，而是仅仅是打morpholino或者合成的mRNA或者类似的小分子，是不必要打动物极的，任何一个角度打了，尽量往卵的正中间插，打了就行了。9 X+ T! p) @, D- M7 N
在卵产出后10-20分钟，动物极一侧是透明的，另一侧是卵黄，很容易看见的。如果看不见，稍微把卵拨一下换个角度就可以看见。一般正常情况下，动物极是自然朝上的，所以拨一下就能看见。在45分钟之后，动物极就开始分裂了，就更容易找到了。. D" O9 s8 N- {! H$ Z3 q' q2 X8 @' C9 J

珊野love

回复 jdrkna 的帖子; o" i- M2 h* r" ^& [3 t' |$ b( x, ]5 c

$ B; ^) N& N/ o+ O. T! ~2 a楼主能不能发给我一份啊，等级太低下不了，谢谢了，邮箱taoran0227@163.com

珊野love

回复 ying 的帖子. _. |! K; E) \3 L: a
' p4 N" N/ ?" l  I
我现在要做斑马鱼的显微注射，请问注射的最佳剂量和针的直径大概多少啊，还有注射时怎么能找到斑马鱼的动物极，谢谢了~~

ying

呵呵～我改做干细胞之前就是专门做这个的 ：） 兄弟姐妹们要是有问题我也许可以帮点忙。我会注射，斑马鱼原位杂交，斑马鱼拍照（活的和杂交显色过的），体外合成注射用的RNA，和一些其他基本操作。

houliming

没有资格下载，麻烦楼主传一份，谢谢了。                     邮箱：mnhouliming@126.com