求教：如何提高脂质体lipofectamine TM 2000的转染效率

mckf111

各位前辈 小弟现在做B16F10鼠黑素瘤细胞转染 用的质粒是pIRES2-EGFP 脂质体是英骏的lipo 2000
! p" a! t' _2 s1 C7 F先开始在六孔板接种 大概长到70%左右行转染（因为此细胞消化后极易成团 吹打N次也没啥用 所以孔内细胞克隆很不均匀 有的地方密 有的很疏 ） 过了36-40h后 发现孔内大概只有5%-10%的绿荧光细胞 而杂细胞基本铺满 接着 消化到其余两个孔 过6h加G418（900mg/L）筛选 过三天只有少许细胞死亡 于是加压到1200mg/L 又过三天死了不少 但是新长得也很多 荧光显微镜下观察 每孔大概只有1-2个阳性细胞 于是 放弃。。。% @# [% x) [3 [; G1 T
请问各位 我应该在哪些步骤做如何改进 能够提高转染效率 而不至于筛选的阳性细胞太少？？？

mckf111

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( }1 v  B% U6 F4 Y& A% l" F* K2 D) s# N9 g/ G2 A* Q0 t
非常感谢 再问下筛选前细胞融合度大概要多少合适？

mckf111

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' A) W# x' V' a8 u: H% h7 x
. y) b* w  t, S2 g你的转染效率如何啊？

mckf111

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$ S- r7 E: u) M, t' R2 j7 v
, S# A% x' m/ z# o6 a, w- B什么细胞啊 这么高的效率。。