MACS分选老是堵管 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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查看: 21397\|回复: 5	go [请教] MACS分选老是堵管 [复制链接]

shengxiaqq

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楼主

发表于 2011-3-20 16:27 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

macs分选老是堵管呀，我是严格按照实验步骤来的呀，分选的是cd133的前列腺癌细胞，后来选出来的大约只有1%左右的细胞，做流式分析时发现几乎没有表达，前列腺癌细胞是不是不表达cd133呀，有没有知情大侠解释一下呀

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wwy551

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优秀会员金话筒

沙发

发表于 2011-3-20 20:42 |只看该作者

回复 shengxiaqq 的帖子8 [, M1 a2 T* O
0 z& O3 x0 p0 X4 E6 L1 l8 F
建议分选之前用DNA酶处理一下待分选的细胞，或者用Dissociation Buffer处理一下，这样可能会好一点，而且在把分选的细胞样品上到柱子上的时候过一次300目的滤网，分选的细胞样品用1.5~2毫升PBS+BSA重悬，尽量稀一点，这样不会堵，分选的纯度也会很高。 i4 z/ v0 @, D
分选的过程中如果堵了，可以把已经结合到柱子上的细胞推下来，重新过一个柱子，当然最好不要。( [9 s8 |6 i! e# ~( x9 m/ X; W
像你这种情况也确实会造成最后分选的效率和纯度不高。

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zhuanzhuan

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藤椅

发表于 2011-3-21 08:32 |只看该作者

你是养的细胞系呢还是从组织上分下来的呢？如果是养的基质细胞，用胰酶消化时间长一点，呈单细胞了再做后续操作；如果是从组织来的细胞，则需要过70微米的筛网了哦！

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amosummer

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金话筒优秀版主帅哥研究员积极份子优秀会员小小研究员

板凳

发表于 2011-3-21 08:42 |只看该作者

我之前做分选也出现过相同的状况，分选柱到后面都无法动了。特别是一般做这个实验都在晚上，一不小心就到凌晨1-2点，做到头都大了。后来老师告诉我，可能没有消化完全，特别是还有一层黏膜。不过我也觉得可能细胞数量还是多了些，要么你拿少量的先试试，消化彻底些。有结果一起分享下，看是不是好做。因为我也特别想知道，只是最近没有样品来而已。