大家在做miRNA的下调（microRNA loss-of-function）时用哪种方案

runsong

fengjh100

在基因功能研究中，最有效的方法是阻止特定基因的功能，然后了解其后果。miRNA同样如此。
" J# q! R" x9 A% S" t  G" {9 z5 x- @# B
然而，相比之下，miRNA的功能研究要困难得多。为什么？首先，miRNA没有蛋白产物，这使得研究复杂化。其次，miRNA的生物发生有多个步骤。最初的转录本为pri-miRNA，它在细胞核中加工形成前体pre-miRNA。这个茎环结构的RNA输出到细胞质，被Dicer酶进一步加工，最终形成了成熟的miRNA。成熟的miRNA没有poly(A)尾巴，因而检测起来要颇费一番心思。
* j: n9 F; G! O4 s9 B; m+ \- i9 c; }
* j1 |" O# G2 U# Q9 x( ?除了检测，miRNA的功能丧失（loss-of-function）研究也是难题。标准的RNAi技术行不通。成熟的miRNA与siRNA不相容，因为它们两者都能进入RISC复合物；pre-miRNA是茎环结构的，siRNA无从下手；pri-miRNA貌似是siRNA最容易靶定的，但一个是细胞核，一个在细胞质，好似牛郎织女，无法见面。
8 B! }  k4 l2 a" C, b0 ?8 s* u% x* a' Z; O7 v
当然，科学家们也不是束手无策。miRNA不是能与互补的mRNA结合吗？他们就开发出与miRNA互补的寡核苷酸，作为mRNA结合的竞争性抑制剂。这些抑制剂实现了短期分析，在细胞培养物以及某些动物实验中都获得了成功。但是，如何实现miRNA的长期抑制？9 w8 G3 U. c, k) j$ H' u. Z* b! C
! P* r3 R/ }% u$ [$ q
2007年，麻省理工大学的Phillip Sharp及他的同事利用相似的原理，开发出一种长期抑制miRNA基因的高效方法1。他们称之为miRNA海绵（miRNA sponge），意思是吸满了miRNA，这样它就无法与天然靶点结合。miRNA海绵是一条mRNA，其3’ 非翻译区（UTR）包含若干个miRNA靶定位点（如下图）。更重要的是，这些靶定位点在RISC切割位点有一些错配。这样，抑制剂mRNA就不会被降解，而与RISC稳定结合，让它远离天然的mRNA靶点。

茅草无敌

我想问问那个miRNA海绵是什么啊6 D# l! N" A  a' D% ~

jkfly

从方便和实用的角度肯定是miRNA海绵好啊，我自己做觉得这个好

libingnan11

这个microrna的下调可以直接去公司合成，不过我们用的psuper质粒， psilencer 也可以

274996064

psilence 3.0    我们的载体是从别的实验室拿的

runsong

回复 274996064 的帖子
3 v/ Q# g3 ]8 k+ Y4 }% F  h: z9 }" O. t+ g
我想一直下调，请问你们用什么载体呢？

274996064

这主要是根据你的实验的需求来说的，你要是希望一直都是下调的就要用到载体
" f. K* U* J. j- {要是只是瞬时的下调用单链的RNA就可以 各有各的用处

fantafiction

不懂