western blot 膜再生液（一抗洗脱液）配方

runsong

做western blot时有时因为蛋白样品少，希望将一抗洗脱掉，再砸其他抗体。
) |9 v! O* r% a8 n- Y8 L, G望前辈提供配方。
: m0 s* L* Q4 A: j注：我们不想买商品化的，以节约经费。

amigel

我们实验室一直用的，放心绝对work

runsong

顶起

amigel

Stripping Buffer:
. b/ |5 y0 C- z4.925 g Tris-HCl (pH to 6.7 in 200 ml of dH2O)  final = 0.0625 M+ _  a6 k: y  D( Q( P: P. C2 r, \
3.52 ml ß-mercaptoethanol 3 p2 q9 x0 h1 r( S1 U8 b/ f8 |$ X
10 g SDS/ y9 N5 Q$ X& }( S% ^
Fill to 500 ml with dH2O  g) P# I: Z  G

5 }( _3 z* m7 N8 ^$ |50度水浴保温30min后取出用大量TBST洗，封闭后再用抗体检测

amigel

上面配方中是3.52ml beta-巯基乙醇

runsong

回复 amigel 的帖子' V) D% n9 f$ n) B
8 z& x# @5 N" ~' p: ]+ x
这是你在网上找的还是你们实验室里验证过的

siyue13

商品化的，才几百块一瓶，不贵的

hcluo

本实验室使用的strips液：
% v0 A/ [, g1 b* y8 n7 e0.5M TRIs HCL (PH 6.8)   6.25ml
. Y* J6 B) b0 d: R1 G: L巯基乙醇                         52ul
" E; R# i$ [8 B" M% Z/ Q20%sds                           5ml
+ `) E6 ]& b' ]  M# h$ R2 P加水至50ml
$ O$ Y8 z6 l% g+ _2 v2 q% y: d- b% K

王乾

给你个最简单的，0.8M 的氢氧化钠30秒即可。

runsong

回复 王乾 的帖子) r* j9 w; m/ U5 w$ @& u
" q1 x3 _' @4 q
谢谢，那温度有没有要求？