western blot 膜再生液（一抗洗脱液）配方

runsong

做western blot时有时因为蛋白样品少，希望将一抗洗脱掉，再砸其他抗体。8 R2 G* R' \0 V( i
望前辈提供配方。
# _# ^' F( a" E" S% ]注：我们不想买商品化的，以节约经费。

amigel

我们实验室一直用的，放心绝对work

runsong

顶起

amigel

Stripping Buffer:$ u2 j4 l! p. x1 {6 R8 M% @
4.925 g Tris-HCl (pH to 6.7 in 200 ml of dH2O)  final = 0.0625 M( \. v# S8 _& j8 {+ F
3.52 ml ß-mercaptoethanol : T0 }0 A- }# s6 B( h
10 g SDS
: X! n) v( Q% r. q3 B: v( gFill to 500 ml with dH2O
7 p3 p' F1 Z% ~% S
/ T# x2 o5 }& Y' S9 X50度水浴保温30min后取出用大量TBST洗，封闭后再用抗体检测

amigel

上面配方中是3.52ml beta-巯基乙醇

runsong

回复 amigel 的帖子" E- o0 `, P# s* C9 H4 H

' \1 B$ K0 M+ y这是你在网上找的还是你们实验室里验证过的

siyue13

商品化的，才几百块一瓶，不贵的

hcluo

本实验室使用的strips液：, E+ o4 ~- V, m# r' s
0.5M TRIs HCL (PH 6.8)   6.25ml( B* o/ J- H( [7 e. A8 ^! k5 t
巯基乙醇                         52ul
1 G! N/ G- r% v7 ]20%sds                           5ml$ A' J) W/ R" ^/ a  S+ w  Z1 J
加水至50ml
/ K5 n0 j) F  p! c( l1 Z; g

王乾

给你个最简单的，0.8M 的氢氧化钠30秒即可。

runsong

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9 @  F. c& V0 X
3 ]2 ^' `: w% ^1 ?0 c* D谢谢，那温度有没有要求？