western blot 膜再生液（一抗洗脱液）配方

runsong

做western blot时有时因为蛋白样品少，希望将一抗洗脱掉，再砸其他抗体。
0 ?: {' J4 _2 H# l8 {6 Z望前辈提供配方。3 p% k6 T2 U" y# V7 E. q
注：我们不想买商品化的，以节约经费。

amigel

我们实验室一直用的，放心绝对work

runsong

顶起

amigel

Stripping Buffer:: K5 [4 G1 a$ ~/ ~
4.925 g Tris-HCl (pH to 6.7 in 200 ml of dH2O)  final = 0.0625 M0 X5 t6 q/ J. y
3.52 ml ß-mercaptoethanol
! v& o3 a, B" ?% |. V' A10 g SDS, H1 X, K/ U8 a3 M; ^  b" y
Fill to 500 ml with dH2O3 [2 E  ]7 e& ?# P! _& r1 {2 l

& K- H  [6 h, N  R+ k/ k* b7 L50度水浴保温30min后取出用大量TBST洗，封闭后再用抗体检测

amigel

上面配方中是3.52ml beta-巯基乙醇

runsong

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( T$ R) ~2 C% o, b2 g% @+ V$ P4 D% B  N5 T
这是你在网上找的还是你们实验室里验证过的

siyue13

商品化的，才几百块一瓶，不贵的

hcluo

本实验室使用的strips液：  q$ y+ P5 I' d: f
0.5M TRIs HCL (PH 6.8)   6.25ml. Z7 x# I; `+ l3 J" x0 [3 X
巯基乙醇                         52ul( \) }, m: H7 i
20%sds                           5ml7 Y  J1 U: y$ X. z8 p: ~
加水至50ml
3 F9 P% G4 w/ y

王乾

给你个最简单的，0.8M 的氢氧化钠30秒即可。

runsong

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; `8 G/ M8 @7 ^
3 `- ]8 S2 I7 c1 L) b4 \! _1 K谢谢，那温度有没有要求？