求助：慢病毒诱导

841961279

请问用慢病毒诱导IPS时，使用4个含单因子质粒的效率好还是含三因子或四因子质粒的效率好呢？？

64627675

841961279 发表于 2011-3-30 22:18 # X' Q8 C8 H, h2 \* W) I
请问用慢病毒诱导IPS时，使用4个含单因子质粒的效率好还是含三因子或四因子质粒的效率好呢？？

  J+ T) n7 @0 L/ q
这个问题比较麻烦，从目前来看，用的比较普遍的是四个分开的病毒，偶尔有说是几个因子在一个载体上的，主要的原因是慢病毒本身包装就比较可能，单个基因已经很大了，三个或四个那就更难了，病毒质量很难保证，个人分析另一个问题，就是从目前情况来看，除了OCT4和SOX2以外，另外两个即使没有的话，也可能得到IPS，四个基因分开的麻烦在于不好控制病毒如何均匀感染细胞，相反几个基因在一个载体上最大的好处就是只要能感染上细胞，必然是同时含有这几个基因，当然如果几个基因在一个载体上能轻松包装出病毒来，我想大家肯定会首选这个，最好还能带个GFP或RFP，那就是完全的理想状态了，呵呵。

jiays

请问二楼感染时机一般如何选择，如果2个不同的慢病毒质粒感染细胞，是同时感染细胞，还是间隔感染。

ljzmy82

现在也很很多用单因子Oct4做了，为什么不试试呢，这样岂不是得得IPS不是更好吗

64627675

jiays 发表于 2011-3-31 08:35
# Y( [" j' T9 D6 `1 k请问二楼感染时机一般如何选择，如果2个不同的慢病毒质粒感染细胞，是同时感染细胞，还是间隔感染。

, v" @- o- n5 k
感染之前要先做预实验，了解感染这个细胞所需要的MOI值，同时要对你加进去的每个病毒进行滴度检测，这样你就知道每个病毒该加多少了，我们是同时加进去的，没有先后

64627675

ljzmy82 发表于 2011-3-31 09:25 / P" s$ C3 O0 g
现在也很很多用单因子Oct4做了，为什么不试试呢，这样岂不是得得IPS不是更好吗

! ]$ _! u% \  ?5 Q  H. }/ _
单因子能做出来那是最好了，不过风险太大，即使可以的话，成克隆的速度也很慢很慢，成功的几率相对来说低的太多

yongchen1314

若目标细胞其内源性表达相关因子，并且其表达水平与ES相当，可以考虑跳过该因子，Oct4在这几个因子中的相对重要性应该是得到肯定的