干细胞传代中的问题

rongrong

在干细胞传代中是吹散开好还是不吹散好？吹散开或者不吹散那种情况会导致分化啊？？

jefferson

不知道你说的干细胞是指的哪种# ?* L/ ^5 o% V# B: ]  Q6 y# G, I

/ @5 h/ A: q- q* D5 ]如果是鼠的ES细胞, 消化吹打成比较小的团块甚至成单细胞都是可以的, 其增殖能力较强
0 R5 E9 q; m3 n3 ~. k4 O1 `5 Y
% V3 c& k9 n" d0 t/ ~如果是人的ES细胞, 消化吹打时应避免团块过小, 如果成为了单细胞, 则很难生长起来. 4 G7 @% b6 A9 M; S, z

1 U- @" x) F* [1 w9 jiPS细胞和ES细胞基本相同2 Q# B2 f  M% W- D
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传代时团块过小克隆可能无法增殖起来最终分化凋亡, 如果过大, 传代后前几天基本是没问题的, 但三四天的样子克隆会长的过大, 内部或边缘就会出现分化的情况. 所以过大过小对分化都是有影响的.
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, o  ]1 K3 Z0 Z8 u在日常培养中,克隆的分化与否主要取决于培养体系是否合适稳定.

rongrong

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谢谢您的答复，我培养的是ips细胞，人的，像您上面说这样很难把握啊？到底是怎么吹才能合适？？过小不好长起来易分化，大了也易分化？？怎么合适啊？没有经验，麻烦了

haijing12585

回答的很精彩，学习了！

jefferson

已10倍物镜观察克隆(总共放大100倍), 克隆面积大概是视野的40%-60%时需要进行传代, 消化后将克隆整个吹下来, 此时克隆肉眼观察是小片状,在离心管中自然沉降或者200g离心沉降洗脱, 然后加培基吹打, 吹成肉眼看成细沙的粒状细胞团就差不多了, 接种MEF后24小时后观察贴壁的克隆, 大概50-100个细胞左右.1 m) ?' q+ Y8 n5 a! y
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刚开始做没经验, 不要打的太小, 可以适当大点接种, 保证克隆能够存活, 然后注意观察细胞的生长情况, 积累经验. 因为如果吹的打了, 那么缩短传代时间, 三四天后再传就可以. 如果吹的太小甚至成了单细胞,那长不起来就没办法补救了.

rongrong

回复 jefferson 的帖子" x! X7 l3 ^. E) I' S2 j7 p7 `1 u% ?

" w  C! C1 T5 L: {6 _谢谢啊！回答非常明白，这里好人真多啊。。。

nihaohao

我也学习了，谢谢

sarah19860420

我的IPS就被我成功摧毁了。悲催啊。那个大克隆就是怎么都吹不开，后来猛烈地吹后，都变成小片甚至是单细胞了，今天观察好少好少的克隆了。退回原点以前了。 看来消化的时候还是要轻一点了，。但是轻一点又怎么能确定吹成细沙状呢。不能吹起泡泡来，是因为会影响分化吗？

sguy

回复 sarah19860420 的帖子* Y0 ?# [. n5 l! ?! r+ {) ~2 p

+ C2 i# T- Q- u3 Y8 p8 H我估计是酶没有消化开，

michaelgibh

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人的ips细胞传代很简单的，没有那么脆弱，不知道你用什么培养基培养，我们用的mTeSR，传代时用2 x despase消化两分钟，直接把despase吸掉，然后用F12洗三遍，再加培养基用枪头沿不同方向开始刮细胞即可，刮的差不多了就可以按比例传了，比例随你自己定。这样有简单细胞生长又好。