干细胞传代中的问题

rongrong

在干细胞传代中是吹散开好还是不吹散好？吹散开或者不吹散那种情况会导致分化啊？？

jefferson

不知道你说的干细胞是指的哪种
: B) v/ P2 I  G! s8 C. }; M/ P- P; s& `" O
如果是鼠的ES细胞, 消化吹打成比较小的团块甚至成单细胞都是可以的, 其增殖能力较强7 `0 S$ ^  ^9 s. j/ D

, B. F% A- |0 j+ b6 l如果是人的ES细胞, 消化吹打时应避免团块过小, 如果成为了单细胞, 则很难生长起来. 4 W" k$ L( ~! V8 k

7 R( O6 T4 ]* Z" KiPS细胞和ES细胞基本相同
0 Y: y9 n) m" ~, }# ]6 \6 \. |4 @9 a$ T6 U, f! D
传代时团块过小克隆可能无法增殖起来最终分化凋亡, 如果过大, 传代后前几天基本是没问题的, 但三四天的样子克隆会长的过大, 内部或边缘就会出现分化的情况. 所以过大过小对分化都是有影响的.: q4 X7 }* }+ r" b( \' ~
3 `, t8 i. E% z# B" F# \% ~1 B! m
在日常培养中,克隆的分化与否主要取决于培养体系是否合适稳定.

rongrong

回复 jefferson 的帖子
2 w1 \8 ^! p; ], y
# o2 g# \' T/ {9 Q( A. o谢谢您的答复，我培养的是ips细胞，人的，像您上面说这样很难把握啊？到底是怎么吹才能合适？？过小不好长起来易分化，大了也易分化？？怎么合适啊？没有经验，麻烦了

haijing12585

回答的很精彩，学习了！

jefferson

已10倍物镜观察克隆(总共放大100倍), 克隆面积大概是视野的40%-60%时需要进行传代, 消化后将克隆整个吹下来, 此时克隆肉眼观察是小片状,在离心管中自然沉降或者200g离心沉降洗脱, 然后加培基吹打, 吹成肉眼看成细沙的粒状细胞团就差不多了, 接种MEF后24小时后观察贴壁的克隆, 大概50-100个细胞左右.  @' z7 U$ U# q. k9 x
* ^9 G" a/ U" [: p
刚开始做没经验, 不要打的太小, 可以适当大点接种, 保证克隆能够存活, 然后注意观察细胞的生长情况, 积累经验. 因为如果吹的打了, 那么缩短传代时间, 三四天后再传就可以. 如果吹的太小甚至成了单细胞,那长不起来就没办法补救了.

rongrong

回复 jefferson 的帖子) P6 c: W- R9 w- ?! M; t2 j
9 }' v7 P0 b7 M1 o8 |- k" c
谢谢啊！回答非常明白，这里好人真多啊。。。

nihaohao

我也学习了，谢谢

sarah19860420

我的IPS就被我成功摧毁了。悲催啊。那个大克隆就是怎么都吹不开，后来猛烈地吹后，都变成小片甚至是单细胞了，今天观察好少好少的克隆了。退回原点以前了。 看来消化的时候还是要轻一点了，。但是轻一点又怎么能确定吹成细沙状呢。不能吹起泡泡来，是因为会影响分化吗？

sguy

回复 sarah19860420 的帖子
$ r8 l. ?! U& |/ ]8 M+ I; r+ n
5 W, i' \6 D# e/ o/ f! G0 T, m9 S我估计是酶没有消化开，

michaelgibh

回复 rongrong 的帖子  @) i6 b! Z5 y* Y# H/ Z
7 S9 V! P. j1 l, q: C- b6 H4 p
人的ips细胞传代很简单的，没有那么脆弱，不知道你用什么培养基培养，我们用的mTeSR，传代时用2 x despase消化两分钟，直接把despase吸掉，然后用F12洗三遍，再加培养基用枪头沿不同方向开始刮细胞即可，刮的差不多了就可以按比例传了，比例随你自己定。这样有简单细胞生长又好。