sd大鼠来源的ADSC图片，大家帮助看看！

winqi

本人刚接触ADSC，前段时间提的sd大鼠的，共提了三批，
8 H7 H, B4 s+ F* T0 c6 I- W刚开始都是这样，觉得长得还不错，密度可能大了点！
1 W$ ^; `! A8 ^8 w4 G0 ~2 M. i+ ~. G9 U, m0 E2 k) E
可是等一传代，细胞就变样子了。几批细胞都是这样，细胞铺的太开了！- P! A$ j& Y0 a* ~( ^' |: p

5 E5 A' J9 A8 q& ]; g2 S( J0 R* f; X' ]: q

4 Z. j( k  A! L. Q培养液就是10%fbs+L-DMEM加双抗。
+ o: A8 x, G9 U1 ^所以请大家给我看看！

impingfan

我做小鼠的MSC也是类似情况，原代贴壁细胞状态很好，消化后就铺开很大，并且越往下传代细胞状态越不好！每次传代都会有一部分细胞消化不下来，继续加培养基也能长，不知道是不是MSC

luwei8157

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* w. H* u+ t" x! ~3 w; V$ M+ [( g! u! i$ I# U& k0 r
可以用 冻存和其他细胞一样 用血清和DMSO就可以

clairezy1983

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  I; @, B. L$ w2 I1 G) \, f  N8 t- M& X0 H  P
我一开始也总是犯这样的错误呢，越传越不好。消化不下来的都不是干细胞了哦，干细胞是相对容易消化的。消化不下来的就不要了。我们实验室有一个经常做小鼠MSC的牛人这么说的。

winqi

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" ^# c: B/ d  b0 K) G% b
6 P, u& J/ q( `  u# G( W我现在做的是向成骨方向诱导，细胞能用吗？
+ |& m, G. h* S2 h; z0 }; kADSC在冻存上有什么特殊的要求吗？

winqi

回复 clairezy1983 的帖子8 f1 r+ H) m6 [$ R7 S
6 p& o$ }& w4 f7 a% W! P/ Y  g
因为贴的太厉害了，很难消化下来！4 U* J* c+ t/ e" r' v; k/ T+ t
我先去培养液，pbs冲洗两次，加1ml胰酶，要消化5分钟才能消化下来！传代的时候就怕密度小，都是一传一的。) G7 k2 ]; F1 @9 I- X: y
有什么需要注意的地方吗？

luwei8157

传代密度大一点，这样铺开的细胞还算可以，大部分实验可以用的0 P: M2 @- }7 q3 ^- ?* Y# ^) |
如果做再生，尽量状态好点

clairezy1983

回复 winqi 的帖子# x( D9 ^* {  f; N) J0 f! T. Y& j& R

6 I, w7 j% G( m" v$ H/ B可能是消化过度导致的哦，传代的时候密度大一点。9 X( P, Y. D% v6 r4 S' S, `
大鼠的MSC我没有做过，我做过小鼠和人的MSC，我一开始做的时候总是存在消化过度的现象，小鼠骨髓来源的MSC消化时间要长一点，人的脂肪和骨髓来源的MSC消化都很快。慢慢掌握就好了，不要着急，多摸索多总结。. ]% U" _5 w% w4 o( ?, H
你可以少加点胰酶。