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慢病毒载体上一般会有tet抗性基因，可以通过Dox筛选？
. ]; ~- n* O$ }5 h: o4 RDox怎么开启外源基因表达的呢?
5 B, }) o: W- b9 p* V$ C6 B& |pTet-On基因表达系统是1992年Gossen等设计的一种受四环素调控外源基因表达的高效真核表达体系，该系统有两种表达质粒即调节质粒和反应质粒组成, : |4 {5 ^2 b2 z' g# t; h
调节质粒可表达一种融合蛋白称四环素反应转录活化因子(Tetresponsivetranscriptionalactivator,tTA), 该因子可与反应转录的四环素反应性元件(Tetresponsiveelement,TRE)结合。
, d+ h- A, x; [' a% ?在没有四环素(tetracycline)或其衍生物强力霉素存在的情况下, 引起插入启动子下游目的基因的高效表达。; e6 _% o/ D; E/ d4 [
pTet-Off，相反，随着四环素浓度的增加, 基因的表达以一种剂量依赖性的方式逐渐关闭直至为零。
+ A) Y' a. A! A& j8 h! |; Q诱导倍数按下列公式计算:诱导倍数=+Dox/-Dox诱导倍数>20者为高表达克隆。
2 F* q2 n6 v3 z/ p5 `: }% n
* K% r5 `1 \. W# o* h$ b* V( t" W$ k- R7 `7 h
最近看了一篇文献（Matthias Stadtfeld.Induced Pluripotent Stem Cells Generated Without Viral Integration,science,2008），利用的似乎不是利用病毒载体做的，而是利用Oct4-IND的等位基因可诱导转录激活做的，很迷惑，求解答。 |
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发表于 2011-4-11 16:25
