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慢病毒载体上一般会有tet抗性基因，可以通过Dox筛选？
" Y/ ? X$ o0 t4 r; d8 dDox怎么开启外源基因表达的呢?
% f1 H' p3 E) k6 r3 ~( p: w# upTet-On基因表达系统是1992年Gossen等设计的一种受四环素调控外源基因表达的高效真核表达体系，该系统有两种表达质粒即调节质粒和反应质粒组成, ) l8 {; z6 R) V$ M! o9 s: P
调节质粒可表达一种融合蛋白称四环素反应转录活化因子(Tetresponsivetranscriptionalactivator,tTA), 该因子可与反应转录的四环素反应性元件(Tetresponsiveelement,TRE)结合。
! U, I+ c1 O4 P9 \1 A5 C( u在没有四环素(tetracycline)或其衍生物强力霉素存在的情况下, 引起插入启动子下游目的基因的高效表达。3 z; q) ~$ u" _; ?1 {
pTet-Off，相反，随着四环素浓度的增加, 基因的表达以一种剂量依赖性的方式逐渐关闭直至为零。
7 ]* q, u, X: H. {. ^+ R! I9 Z诱导倍数按下列公式计算:诱导倍数=+Dox/-Dox诱导倍数>20者为高表达克隆。
; G" `0 r- j9 V( h$ E2 Z: o n
) X6 P, x2 j( P8 n
/ W$ D( Z- v0 ]# k, O最近看了一篇文献（Matthias Stadtfeld.Induced Pluripotent Stem Cells Generated Without Viral Integration,science,2008），利用的似乎不是利用病毒载体做的，而是利用Oct4-IND的等位基因可诱导转录激活做的，很迷惑，求解答。 |
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发表于 2011-4-11 16:25
