求胚胎干细胞的冷冻方法

随心

这边做的是小鼠胚胎干细胞，用3.5cm板养的，具体步骤如下：
, i+ W/ C1 @9 ?, O. `1.提前将保温杯放入-20℃待用.
8 G: Y, h4 ~, p5 @# y2.提前两小时给干细胞换液.
: c" w" Z8 g' o0 k* q" f3.开始冻存,把培养基去掉,用pbs洗一至两遍，加1ml胰酶消化1min。( b. @# Y7 e, M* y' ~; ^! Z
4，去掉胰酶，加1ml培养基把细胞吹打下来，加入离心管，1000r，一般我们离7min。3 I* U/ {; s" B# I
5.加入1ml培养基吹打均匀
1 w& k- i$ {  b6 e6，加入10%-15%的二甲基亚砜，根据细胞的多少，大概冻几管，计算好DMSO的量。一般一管2乘10的六次方左右最好。4 u3 V/ |" r; E
7，分装冻存管，每管大概总液1ml.
9 M  J1 ~  ]# n6 D! g8.把冻存管放入预先准备好的保温杯中。& T0 ^% S+ ~0 f3 H% \7 T
9，送至-80℃过夜。
2 c" X' o; a8 F& X: m10.第二天一早转移至液氮中，做好记录就可以了。( \+ ~: b+ q. q2 {
我们一般晚上冻存，这样做完直接送至-80℃过夜了，时间正好。