脐带间充质细胞原代培养

gaorongbest

我们在做脐带间充质原代时，用组织块培养到5-7天时可以看到细胞爬出来；但是用胶原酶消化1小时却没有什么细胞呢？怎么用消化法消化的细胞多一些呢，我们是加等倍体积的胶原酶，请大家指点一下阿

sunjianhua2000

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! G! ^% `1 T: d. z4 c' q我也正在做脐带间充质干细胞培养，从目前所查文献了解到，消化法现在用的双酶法比较多，你可以查资料参考下！

gaorongbest

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我们单用胶原酶消化的，1小时后没有细胞，你用消化法做的好不好？双酶中的另一种是胰酶吗？你做的效果好不好？
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leungyk

+ [  H/ B  x. W6 |
3 V: C6 P( v4 _: g
我們用胶原酶，一般於37度消化兩小時後,有3-10 x10^6 細胞 (指總細胞量，不是MSC)，當然，這跟臍帶長度乜有很大的關係。

zarecol

你用的是哪种胶原酶？一般二型胶原酶消化20分钟左右效果就很好了，你如果消化1小时没有细胞的话，可以考虑胶原酶的浓度是不是过低，另外，消化前最好做预处理，将脐带剪成小块再消化，使酶液和试验品充分接触。

柏林小杨

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; l2 G- P+ V; y+ K& F3 K% s
; i/ T& b0 C; t8 A5 m6 s! i你的胶原酶的PH是多少啊？

gaorongbest

回复 zarecol 的帖子# E) ?0 ^; l* \/ c. A

/ g+ R  A; z& ~  d我们用的是一型胶原酶，没用过二型的，是300个单位的浓度，应该不算低吧，我们是将血管什么的去掉后剪成小块消化的，两次了，都没有细胞。

gaorongbest

回复 柏林小杨 的帖子1 l% s/ W% F7 Y9 o
) X# ~: s5 J0 o9 F! @/ i2 O, Z
我们没测过胶原酶的pH，一般都是现配的胶原酶。

柏林小杨

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4 s/ I! S. l' _; V; }) L5 a
: t$ [% C  U/ v+ R. U& K# A/ i那你得找找细胞是怎么变没的了

zarecol

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! O, ~8 F$ B* I" d- g8 a
/ N$ h; Y' o' r5 x! q1 p( j没有细胞？我不知道你指的是什么，消化后肯定有细胞，即便你剪碎后不去消化，直接收集起来过滤离心后也是有细胞的，我想没有细胞的话，可能是因为你在消化之后没有充足的清洗，导致细胞悬液的密度过高，离心不足以使细胞沉降，你可以消化后多洗几次或者改用组织块法，希望能帮到你。