猪胚胎操作各种液体配方

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猪胚胎操作各种液体配方：2 X, W" |. l' A
（1）洗卵液：改良TL-Hepes-PVA液，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/瓶分装并用封口膜封口保存于4°C备用，使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。2 y% F0 u) S7 b
（2）卵母细胞体外成熟培养液：改良TCM-199液（Gibco, GrandIsIand, NY, USA）,其中添加3.05 mM D-葡萄糖、0.91 mM丙铜酸钠、 75 μg/mL青霉素、50 μg/mL链霉素，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液A；储存液A添加0.57 mM半胱氨酸、10 ng/mL EGF，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C即为储存液B；使用的前天晚上储存液B添加10% pFF、10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH即为工作液A，第二天晚上储存液B添加10% pFF即为工作液B。1 y3 k4 D/ K; ^! r9 _3 I
（3）胚胎培养液：NCSU-23，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液；储存液添加0.4% BSA，溶解后用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液，使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。' y7 a1 ^. T& u% O/ z
（4）6-DMAP液：NCSU-23 + 0.4% BSA + 2mM 6-DMAP，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液，使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。
" k* o) \: v1 Q& j. `: [3 B9 x- s  X（5） 操作液：洗卵液 + 10% FBS，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装保存于 - 4°C备用即为工作液, 使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
" e. X5 n: C. T4 G( o# _9 Y（6） 融合/激活液的配制：0.25 M甘露醇 + 0.1 mM/mL MgSO4 + 0.1 mM/mL CaCl2 + 0.5 mM Hepes + 0.01 % PVA，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10 mL/管分装保存于 - 20°C或 - 4°C备用，使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
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这些都是好东西，如果大家还需要进一步了解，可以尽管提问

cony

如何解决精子活力低问题？还有如何提高囊胚比例？

fantafiction

请问猪卵电激活和化学激活（6dmap）那个更好/？

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. |3 P% `$ V# f& J: k  H; B2 \' B9 r- s* e1 S1 j) C/ u4 d
呵呵，无论单用电激活还是化学激活都不是太理想，如果将两者结合使用也就是说电化联合激活效果会更佳

461650833

我们实验室用的融合液没有放PVA啊  
$ G0 z' Z# J4 F8 X0.3 M mannitol, 1.0 mM CaCl-22H2O 0.1 mM MgCl2-6H2O and 0.5 mMHepes.  这是我们融合液的配方。5 P8 r2 J0 f. V( U2 d  E8 @6 _

461650833

想了解猪胚胎核移植的 可以看看这篇文献
& o- ]$ B. U7 L1 |这个是赖良学的  

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# a, e$ o8 \) e2 n9 d, M. f# u/ D0 `2 }7 F: J; N, g
这个太久了，有最新的吗？

461650833

回复 HMC 的帖子" @; ~4 k. n6 Z6 O9 ^, z

1 a. q. w  _* ~8 C. I4 s' Y我们一直在用啊 也没用最新的  

mayuan3012

融合液不加hepes能不能行？