猪胚胎操作各种液体配方

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猪胚胎操作各种液体配方：- r0 w: j4 W$ Q) x
（1）洗卵液：改良TL-Hepes-PVA液，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/瓶分装并用封口膜封口保存于4°C备用，使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。" g  g4 U" H$ X: V  l
（2）卵母细胞体外成熟培养液：改良TCM-199液（Gibco, GrandIsIand, NY, USA）,其中添加3.05 mM D-葡萄糖、0.91 mM丙铜酸钠、 75 μg/mL青霉素、50 μg/mL链霉素，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液A；储存液A添加0.57 mM半胱氨酸、10 ng/mL EGF，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C即为储存液B；使用的前天晚上储存液B添加10% pFF、10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH即为工作液A，第二天晚上储存液B添加10% pFF即为工作液B。
% F7 _$ G# D. l# w6 C+ M- D（3）胚胎培养液：NCSU-23，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按40 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为储存液；储存液添加0.4% BSA，溶解后用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液，使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。0 ?/ n0 E0 @. @5 A6 i2 S1 X; s. S* T
（4）6-DMAP液：NCSU-23 + 0.4% BSA + 2mM 6-DMAP，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装并用封口膜封口保存于4°C备用即为工作液，使用的前天晚上放入39°C二氧化碳培养箱预平衡。
6 H$ m+ J7 ^, ~! c, |4 u2 `（5） 操作液：洗卵液 + 10% FBS，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10-12 mL/管分装保存于 - 4°C备用即为工作液, 使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。' ^! T6 O8 b+ Y
（6） 融合/激活液的配制：0.25 M甘露醇 + 0.1 mM/mL MgSO4 + 0.1 mM/mL CaCl2 + 0.5 mM Hepes + 0.01 % PVA，用0.22 μm一次性滤器过滤除菌，按10 mL/管分装保存于 - 20°C或 - 4°C备用，使用的前天晚上放入39°C恒温箱预热。
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这些都是好东西，如果大家还需要进一步了解，可以尽管提问

cony

如何解决精子活力低问题？还有如何提高囊胚比例？

fantafiction

请问猪卵电激活和化学激活（6dmap）那个更好/？

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- U5 D! m2 a# m2 ^, U5 w/ y! w
9 X* m# p8 L, X6 U+ s呵呵，无论单用电激活还是化学激活都不是太理想，如果将两者结合使用也就是说电化联合激活效果会更佳

461650833

我们实验室用的融合液没有放PVA啊  
# f3 p' t7 j* ~1 G0.3 M mannitol, 1.0 mM CaCl-22H2O 0.1 mM MgCl2-6H2O and 0.5 mMHepes.  这是我们融合液的配方。
1 a, K3 n) C. s( ]9 v

461650833

想了解猪胚胎核移植的 可以看看这篇文献 & A! ?. S. a: d) E. N/ r
这个是赖良学的  

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回复 461650833 的帖子) K  g+ L" `* [

5 X( G7 |. F: j/ Z# T这个太久了，有最新的吗？

461650833

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2 v9 W6 @) h+ e8 [0 B9 ]! l0 \! y. o) H8 ]
我们一直在用啊 也没用最新的  

mayuan3012

融合液不加hepes能不能行？