MSC成骨诱导的培养基配制、诱导方法和染色方法

aoppolle

我做成骨诱导分化的步骤，7 x2 u9 R1 [& d+ x# I4 I
a) 成骨分化诱导培养基的配制* q* M$ `( L6 O& q" y6 u* P! o
将胎牛血清及添加物加入基础培养基配制成骨分化诱导培养基，将配好的分化完全培养基过滤除菌，储存在4℃。
, _- z4 C9 t+ z" E! I8 M成骨分化诱导基础培养基                             175 mL ! t$ X9 T  r- Z+ n9 |0 f' r% M
Fetal Bovine Serum（胎牛血清）                        20 mL
1 t6 A% j6 Q/ n8 u; ]7 QPenicillin-Streptomycin（青链霉素）                      2 mL
$ Y. R" ~0 O& w; c) H2 FGlutamine（谷氨酰胺）                                 2 mL 6 g8 _/ v* }+ }' \2 Q3 J/ K3 N
Ascorbate（抗坏血酸）                                400μL
3 J0 ~* E8 ~  l* }/ Sβ-Glycerophosphate（β-甘油磷酸钠）                     2 mL5 t$ Y& y0 X& n8 _  ^7 ?" a* n
Dexamethasone（地塞米松）                            20μL
* o9 ]+ I- \1 r: j, q: I7 I5 S! h5 E, i1 i
b)诱导分化) k3 V3 R0 v7 z" ~/ W
1)取第3代细胞，接种于六孔板中。* c% U# W  {% H. P  z* Y. ^% V
2)37℃，5% CO2 的培养箱中培养，两天换液一次。  % a3 \* L$ G. S: c8 J5 D' T0 I
3)当细胞达到50 ~ 70％汇合后，吸去培养液，加入2ml/孔成骨诱导液。 % m. _* l" [- \, W! `
4)每隔 2-3 d换液新鲜的成骨分化完全培养基。 " q% Q2 l$ `# L, ?# I- A  L) _
5)分化诱导3 周后，固定细胞并用茜素红进行钙结节染色。
% L* f8 u5 c& f
/ B1 K. n7 Q1 B$ Jc）茜素红染色
% v7 S' ?) J" n/ U& O/ w; p1)去除诱导培养基，PBS 洗两次。加入4%多聚甲醛固定 30 min。
9 E% h( m) v& D, j2)吸去固定液，PBS 洗两次。1ml/孔茜素红染 3-5 min。
% s; |! @! H% U: t+ g3)去除染色液，PBS 洗两次。拍照。/ |/ G3 K' [) ?. Q1 Q, S

luoziwei

能不能请你上传两张这个染色的图片让大家参考？这样大家就能有个模板

黑眼豆豆

不知道楼主茜素红染色结果如何啊！！！？

osterix

楼主写这些东西太笼统了，首先只写体积，没有浓度，那不是忽悠人吗？你算的时候，总体积怎么多了1.42ml，血清20ml，那么10%含量的应该200ml，175+20+2+2+0.4+2+0.02=201.42.科学讲究严禁。

aoppolle

回复 osterix 的帖子
; w5 N" l! z' ~% A& O* K$ ~
3 u  Q# ~! T: s" X9 @' _  C' m. \+ `9 B考虑确实严谨，但是我没有说我的血清是比例是10%，所以我总体积也没有说是200ml

aoppolle

随后我把我做的图片上传

nibirucome

有没有试过不加地塞米松的诱导培养基？

impingfan

楼主是买的试剂盒还是自己配的诱导液呢？

linchee

浓度呢？配制的话，给个浓度就好啦

clairezy1983

回复 aoppolle 的帖子1 R6 ~4 B1 v+ h, p$ F

, y1 M0 X: p  L3 S% G" |我用茜素红染色的时候，是用95%的乙醇固定的，不知道有什么区别没有，我是采用本实验室前辈的方法，有的时候染色液会进入细胞内，我考虑是不是细胞膜破了。下次我也换成甲醛固定试试看。