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( [. U' a0 s7 e; T" K4 m$ ga)成脂分化诱导培养基的配制 Q# i, K# c5 d- e, P
将胎牛血清及添加物加入基础培养基配制成脂分化诱导培养基A和B，将配好的分化完全培养基过滤除菌，储存在4℃。
7 |0 j6 d3 y5 {2 J& z成脂分化诱导完全培养基A：
% y3 j6 Y7 g* @# V7 w成脂分化诱导基础培养基A 175 mL % y" `; j( M% c* _1 d& o7 t2 J- ~
Fetal Bovine Serum（胎牛血清） 20 mL
7 I. Z. D; k$ H7 MPenicillin-Streptomycin（青链霉素） 2 mL + e8 ^9 v8 a8 W' ]+ Q0 W
Glutamine（谷氨酰胺） 2 mL + @; S) P6 c! Z3 m
Insulin（胰岛素） 200μL
. G2 M4 e5 k. Y% m1 G* ]. n YIBMX（3-异丁基-1-甲基黄嘌呤） 200μL
, p2 {# n( x& J; [6 P7 ?3 OIndomethacin（吲哚镁锌） 200μL $ r* ]% P9 X1 k1 z4 E9 X1 J
Dexamethasone（地塞米松） 200μL
/ V: ~, x, m* D2 L, }成脂分化诱导完全培养基B： # k# S- x1 Z* {' Y' @4 H7 W
成脂分化诱导基础培养基B 175 mL 2 C0 m2 D5 X3 j+ b E- f* }4 ]
Fetal Bovine Serum（胎牛血清） 20 mL , t: ?) ]/ N) O
Penicillin-Streptomycin（青链霉素） 2 mL
: }4 `; q% w+ V: ZGlutamine（谷氨酰胺） 2 mL
( N6 J" E8 \2 |Insulin（胰岛素） 200μL, M$ ^1 f" V! n
' [/ ?, ?5 L) J8 x5 Y( n+ T
b)诱导分化：
% W1 E G. V+ \& h1)取P3代细胞，2×105/孔的密度接种到六孔板。
5 A4 ^5 {- P( ~6 Q* T2)37℃，5%CO2培养。
- r1 a$ `, c7 q; j0 w% M' s+ r I- B3)每隔 3 d换新鲜生长培养基至细胞完全汇合。
2 c( }- T5 o' G4)吸去上清培养液，每孔加入 2ml 的成脂分化诱导完全培养基A。
3 u( n' X |9 {; A3 n( r2 k# j, p5)三天后，将分化诱导液换为成脂分化诱导完全培养基 B。 : g& o0 }& T, o! _0 N+ A
6)24 h后，再换回成脂分化诱导完全培养基 A 进行诱导。 $ k8 C/ E! o1 @2 s2 r
7)循环 3～5 次后，用培养基 B维持 7 d，每三天进行换液。 ) K: p; I: t. w4 m) _9 N
8)分化诱导3 周后，固定细胞并用油红O进行染色。 ]0 E0 T& \3 }7 L3 d3 r$ Z
5 }# m7 ]' h3 |6 z
c)油红O染色 + [( l# Q% \9 H5 u9 b( L" p
1)去除诱导培养基，PBS 洗两次。4%中性甲醛固定 30 min。 8 v- k' a# [2 }: h* |# k) D
2)吸去固定液，PBS 洗两次。每孔加入 1ml 的油红O染色 30 min。
" u( l5 W; V! I4 u9 r3)去除染色液，并用PBS 洗两次。拍照。
; I. b/ ?2 H' I5 G" p$ {4 s |
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发表于 2011-5-3 14:26
发表于 2011-5-3 14:51
