基质胶的有效时间问题

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干细胞培养的feeder前要铺明胶或基质胶，这个提前铺的时间长了会失效吗？如果铺好，接种feeder，feeder长满后（比如4天）再灭活，接种干细胞，这时的基质胶会有影响吗？

jefferson

铺明胶最少需要半小时, 只要胶没干掉, 铺了几天的我们也用的不错.8 H: ?  y+ s: a* b3 P0 c/ H! `( }' T
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接种Feeder后,为什么要长满? 你接种的Feeder不是预先丝裂霉素或者射线处理过的吗? 你意思是把正常增殖的Feeder种在皿上, 长满后丝裂霉素或射线处理,再接种干细胞?? 没听说哪里是这么做的, 这样做工作量比较大,效率也比较低吧. 如果这种方法可行, 第一如果你是用丝裂霉素处理, 你需要洗很多遍将丝裂霉素洗脱干净, 以便不对干细胞产生影响; 第二按你说的4天Feeder长满了, 处理后能否坚持7天是个问题; 第三就是, 4天后,我们的感觉是, 明胶的作用效果已经下降了, 有时会出现贴壁性不好的情况; 第四,  你要在传干细胞的时候Feeder刚好长到合适的密度,这个时间点不好控制吧.' |" C/ Q  J5 j: V) R
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通用的稳定方法是, 将Feeder预先单独扩增, P3代以内丝裂霉素或射线处理, 然后冻存; 使用时铺了胶后一个小时就可以复苏Feeder, 按摸索好的细胞数直接接种, 第二天就可以种干细胞了.

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听说灭活后冻存 细胞会死很多的。复苏后 等细胞贴壁马上灭活怎么样