骨髓间充质干细胞直接贴壁法

Learner

我们实验室用直接贴壁法获得骨髓间充质干细胞，效果还不错。骨髓8-10ml 加入培养基HG-DMEM 10%FBS 20ml-30ml，如果用T75瓶培养，加30ML有些过多容易从瓶口溢出来我只加20ml。培养箱孵育三天不要动，也不用看（什么都看不见）。第四天换液加入新的培养基含有2ng/ml bFGF.就可以扩增。如果MSC数目够多9-10天就能长满。

xiao6tao

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8 G$ I5 A' w3 a& V! U  ^1 Z7 j' y& Y$ d8 V. Y! r
4-6周的鼠啊，是大培养皿100×20mm的，不是大瓶子

gaorongbest

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5 H+ A, Q) v$ n7 T' q
你的是大鼠还是兔子？月龄是多少？我们一般都是用小瓶子接种的，没想到你们都是用大瓶子，应该月龄较大的吧，我们也是直接贴壁法培养，挺方便的

Learner

  ]  c$ o- s' T% P

' V% I* X) I2 ]4 e* R1 t回复 biotly 的帖子9 F: w9 o2 I/ y3 T# N+ \

- x% l% x- S2 t还没有！那你的细胞能传多少带呢？我的大约传6-7代就不行了。也许真的是应该用低糖的培养基。那是挺神奇的，你试过用别的神经干细胞marker检测吗？

biotly

回复 Learner 的帖子+ u+ t1 e0 a0 h7 ?8 \

8 ^' E& d! w% W0 O. {( S6 x9 |" n0 E我培养的时候都没有加bFGF，没有分化的情况发生，但是换了高糖就有问题了。是不是一开始用高糖培养就不会呢？你培养的时候有没有换着用过？？9 Z. V& M& ]& G6 H- r' V
分化的细胞我用Tuj1尽然能染出阳性结果，呃，很神奇~~

骨道边

好，明日再拿一只老鼠来做，这次用大鼠了

生物化学zy

我用一只小鼠铺板一个6孔进行培养3天后换液,之后会有很多细胞贴壁,但是感觉不是MSC,有很多杂细胞,感觉像是叠在纤维状的MSC上,没法去掉,继续培养后细胞也不咋长?我用的小鼠是5-6周日龄的.不知道楼主这种情况咋办呀?用的低糖DMEM+10%FBS

Learner

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2 ~% v% C' H1 |3 O( i! I1 x  o) @2 t, b% R! m8 N' T
bFGF的作用是维持其不分化特性，我也看很多文献用低糖，也有用高糖我两种都用过，感觉没太大差异。

biotly

高糖培养基会不会让细胞分化啊，我用293生产的病毒上清空白对照也能让细胞分化啊~~~~

飞翔的十字架

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; c4 k; _# \* T0 R
8-10ml的骨髓量？多少只老鼠啊·······