关于台盼蓝染色

conggu

大家在活细胞计数时，是如何使用台盼蓝的呀？是1:9混合还是1：1混合呀？

LiuRoc

1：9

鹭岛之滨

1:9呢

hualin840518

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; G9 H  U; E: k; J$ z( f& h% i- \4 E1 y  V" J+ }5 v  m
细胞活力鉴定——台盼蓝染色法9 [; j# K) _# q8 ^; l; o
8 V2 ^/ D$ E  d( }
原理：
9 c+ r0 F1 O3 U6 R细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。( y7 N. A* O6 _3 Y

& E+ l) e# Y+ f6 f- |. h用品：
' ]  X; K5 [  W( U- p( o- A4 Q1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。  s& {6 D( ~1 d4 e7 @+ Y
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜  E5 u. d( y2 L% D8 s; `
$ X7 l7 T) _. i+ l, {- K+ S
步骤：  ~4 Y$ y( \& U
1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml）
/ D) s6 ?. @! |* ]; V5 J& a- T2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。$ R/ X6 s. |: X4 y4 t" x8 q. k3 F$ c
3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞1 ~; [; r/ ?4 ~" A6 U6 E! I8 S2 R
1 \& [+ ]) ?( u" |' a# m% I
结果统计：
3 j' o; |4 r! n" N" Q( L7 f镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。
6 K9 j! Q/ m& d+ ?& D  x0 L根据下式求细胞活力：
. |3 |3 y- U  v/ y& o' b: P活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×1003 |& r, D* ~& Y& u, r

. n2 Q9 y7 m5 w, }6 ?, m0 H5 }注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。
7 Z; N5 c5 M6 y

conggu

谢谢楼上，很详细。

王乾

1:1，染得更好一点

tingwuyu

1:9与1：1我都试过，感觉结果没什么不同，就是1:9的镜下颜色会浅一些，1:1会比较深，个人感觉1:9好些

osterix

1：1可能会产生干扰噪声，即背景会高一些，有时候不太好分析。1：9呢，染色浅点，区分的很好。建议1:9

aibi1983

建议1:9，因为1:1假阳性会很多

透明微笑

建议1:9