关于台盼蓝染色

conggu

大家在活细胞计数时，是如何使用台盼蓝的呀？是1:9混合还是1：1混合呀？

LiuRoc

1：9

鹭岛之滨

1:9呢

hualin840518

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9 E( P& P' J* Z% ]8 ~
" q- C: M9 o- L+ {细胞活力鉴定——台盼蓝染色法
5 z# T4 c9 h9 D% V! l5 H9 x) x+ }' [  L' `% H
原理：
8 s  f# a$ s. i* j2 V细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。
8 p  b, N; ]3 ?. h" v- V/ i/ I7 @2 `' x% B! f
用品：2 p) y# u( H9 C' h
1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。0 u- b; o' I6 \! h; J
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜& J; g2 B* X8 b% g

  O7 A- H* e' M步骤：' u0 W1 n4 p9 y& I
1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml）% s8 D# @+ A% w
2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。9 Z+ J, u8 i: H# L; X% L
3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞' l, f$ n" y/ D" ]& @: _
! Y/ M% `5 ?2 S* Q% O  a
结果统计：+ ]# O; I, j) j6 E/ _
镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。1 W  r" Z7 }* ^* J! X$ u) F
根据下式求细胞活力：7 q" }! Z' {$ V# M6 D
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100  r$ m+ S2 i4 r& s

, P8 f- O7 \* c' T4 X' b' ^- a& N! \0 k5 W注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。
" u) y! `" ^. B' i6 o

conggu

谢谢楼上，很详细。

王乾

1:1，染得更好一点

tingwuyu

1:9与1：1我都试过，感觉结果没什么不同，就是1:9的镜下颜色会浅一些，1:1会比较深，个人感觉1:9好些

osterix

1：1可能会产生干扰噪声，即背景会高一些，有时候不太好分析。1：9呢，染色浅点，区分的很好。建议1:9

aibi1983

建议1:9，因为1:1假阳性会很多

透明微笑

建议1:9