关于台盼蓝染色

conggu

大家在活细胞计数时，是如何使用台盼蓝的呀？是1:9混合还是1：1混合呀？

LiuRoc

1：9

鹭岛之滨

1:9呢

hualin840518

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" E" A! O$ r* \, R$ D3 q& j1 T/ K- Y6 j& o( g$ S+ M
细胞活力鉴定——台盼蓝染色法
2 U+ [3 X" n* u6 n% |( t  S. V& Q/ H& N4 Z1 x1 X
原理：
/ b! F1 R9 f1 E5 d. l细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。
7 x$ ~, D4 A/ D+ `1 k) h2 T. ~7 q; }* B3 V2 [; s
用品：5 m" \  n0 F/ V3 m1 Z+ ]' I+ |
1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。4 q. t3 `0 }( [- W' F2 z" C
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜5 Y8 t' d* k4 u( G; D: p4 \# i

* y5 p8 f& |2 e& @% H6 C( o4 w步骤：
# j( B9 f7 ^5 Q, K0 c3 g$ @1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml）
% v' o: w/ K) y# r2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。' M! }$ k' m+ s; E# g6 P& B
3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞; `6 N, c* I5 @1 J5 x! N' p5 S9 V
: `$ }/ V3 j2 |& z
结果统计：
/ v& N! r& m3 {2 s( t) D" |: ~* Q镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。0 t5 g3 c: n9 Q+ W; ^1 ~
根据下式求细胞活力：
: T/ E5 Y2 s$ ^# p6 k4 P活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100
+ {5 t3 w: e0 {5 \% C( h8 T8 @3 g
8 w5 _# V* E! M8 W' `3 ^注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。6 D( a$ X" G( U% q7 k3 n

conggu

谢谢楼上，很详细。

王乾

1:1，染得更好一点

tingwuyu

1:9与1：1我都试过，感觉结果没什么不同，就是1:9的镜下颜色会浅一些，1:1会比较深，个人感觉1:9好些

osterix

1：1可能会产生干扰噪声，即背景会高一些，有时候不太好分析。1：9呢，染色浅点，区分的很好。建议1:9

aibi1983

建议1:9，因为1:1假阳性会很多

透明微笑

建议1:9