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回复 conggu 的帖子8 P4 ^6 _5 F" }8 O
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细胞活力鉴定——台盼蓝染色法6 _3 L6 ?$ k# t v
$ _2 k9 L5 c$ Y原理：4 u- q- l+ Z3 M+ ~: g
细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。8 g9 `. o3 ?& |2 s
) r) e$ R2 D( t3 |! n用品：5 n8 p3 j- x% q3 O
1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。; _5 m8 B9 o% U* A
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
- O; O& z% j$ K5 Y @! z( C F" U, Y) `/ X1 o& @9 @! u% \& S
步骤：
9 E9 l. U+ b0 K2 L7 l1、制备单细胞悬液。并作适当稀释（106 细胞/ml）
1 t+ _7 L8 u, z# Q2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
& n, j% {* N9 `; o! N, x! C3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞
& X' Z9 t' S9 J8 g$ ^
% I& b5 A& B% U9 i, k+ H结果统计：
) u. l2 a6 m5 I1 ?镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。" i2 H: t, g" e* i5 s
根据下式求细胞活力：
+ O2 L4 j. h( @7 b2 T# }- K) K8 Q活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100
7 i" ?! E, Z: f- F5 m) p x; Q1 a9 L, M* D7 d
注意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。
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发表于 2011-5-6 10:50
发表于 2011-5-6 16:59
