求教人骨髓间充质干细胞的提取方法和培养方法

zarecol

       现在人骨髓间充质干细胞的提取方法主要有全骨髓法和密度梯度离心法两种，希望有人能以亲身经验相告哪一种比较好，另外，培养方法上有什么需要注意的地方请大家多多指教，最后，希望能发给我两张培养成功的细胞图片，最好注明代数方法，阶段越全越好，谢谢大家。

biotly

全骨髓培养法比较简单，但是细胞比较杂，需要经过3代左右才能纯化。密度梯度离心法细胞比较纯，状态也比较好，所以本人推荐后者。原代的培养的时候尽量不要去动它，培养2-3天左右再换液。原代的骨髓见充值细胞是呈集落生长的，细胞是纤维状的，排列得比较整齐，传代之后能均匀生长了，但是前2代生长比较缓慢，不要着急，一般7天左右传第一代。一般在3代左右就可以保种了，这个时候的细胞状态比较好，然而这种细胞比较容易衰老，培养条件掌握的好的话能传8-10代，但是一般就在6-7代的时候就衰老了，细胞生长缓慢，S-A-β-Gal染色阳性率很高，所以还是早点保种或者重新原代。我听人说间充质细胞对温度比较敏感，这个我也不是很确定，但还是注意点比较好。骨髓见充值干细胞是比较大的，展开后很薄，相差显微镜下也没什么立体感，厚度在就10um以下，还是比较容易辨认的。
4 R; {" T. N1 ]9 t培养基用的是DMEM低糖，加10%的进口小牛血清，用之前先在培养箱中平衡一下。0 `, D5 I5 R3 N8 R+ m! @+ x, m
图下次再传，祝你好运！！

zarecol

回复 biotly 的帖子8 T3 }# e, L: ~% p) Z; K

" M" Q: ~' h( \7 i; |受教了，期待你的图片，我目前在试验初期，以后希望可以在一起多多探讨。

mason658616

回复 biotly 的帖子! p+ [0 o  Y- \! W0 L, h$ X

) ]) ?/ \" z! k% J, \# j2 ?. y' p我用Ficoll提的骨髓MSC，24小时换液去掉未贴壁细胞，但是2两天了，看细胞还是圆形的，是不是细胞死了？而且圆形的细胞中间有很多小点点，不知道是细胞碎片还是单个核细胞分泌的颗粒还是污染了？培养基正中心有个浑浊漩涡，镜下看又看不到细菌。您用的淋巴细胞分离液是什么牌子的？

taxuewuge

我用个是天津TBD的，遇到的情况和你一样，我取的是膝关节的黄骨髓，分离了很多天，贴壁的细胞都很少。老师说可能与取材有关。建议取红骨髓试试，那样效果要好些。

lkzjyx

我也是做的BMSC，我用的全骨髓培养法，一般半个小时就开始贴壁了  6个小时左右可以完全贴壁  所以楼上的24小时还没有贴的话肯定就不会再贴了* H9 O: y; V, G- o* ^  a7 s
顺便问下你们的Ficoll细胞分离液是什么牌子的  在哪买的  谢谢了