请教脐带间充质干细胞培养方法

mason658616

组织块法和胶原酶消化法哪个比较好？我现在用组织块，但是爬得很慢啊，2周了是不是应该有动静了？2 v7 B! |- J  H$ A1 H& V  I+ W/ j2 l
胶原酶法我查了查文献，有用2型的，也有用4型的，哪个比较好呢？& {. h  M# `" W) \
取华通胶好费劲，尤其是要把动脉静脉剥离下来，每次都得弄一两个小时，大家做过的有没有什么经验分享一下？

mason658616

回复 gaorongbest 的帖子
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谢谢。我第一次做的组织块都漂了2周了，没有细胞。第二次的有5天了，这回剪得比较小，而且先底朝上放置了4小时，然后底朝下加了3培养液。现在看组织还贴着，但是还没有细胞爬出来。我该不该换液?我的培养基就用的10％FBS的H-DMEM，可以吗？

mason658616

回复 tingwuyu 的帖子
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2 E6 G/ c! {$ h- t& e) S6 L: F1 z再请教下，用PBS洗干净脐带后要不要在培养基里剪？我觉得干着操作还稍微容易点，有水的话特别滑，但是组织块干着是不是对细胞不好啊

mason658616

回复 yanmin 的帖子! ?4 x" I, u9 o' u- M( Z
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我的细胞从贴组织块到今天6天了，一些组织块周边似乎有往外爬的迹象，组织块是贴着的，但是外周是漂着的。我没用酶消化，就是把脐带外膜和血管剔除后，取的华通胶，剪得尽可能小，先贴在底上，把培养瓶底朝上养4个小时，再加培养液，底朝下正常养着。要是养脐带MSC应该是不要动静脉的，否则养出来东西比较杂。因为脐带可以养内皮细胞、干细胞和间充质干细胞。

mason658616

回复 zhangmingqi111 的帖子  l, p1 |* T% T( `+ [3 m

9 Y$ B+ G; A3 X4 x用吸管把组织块一个一个加到培养瓶了，摆放好后可以把多余的液体吸出来，然后盖好瓶盖把贴有组织块的底面朝上，放在co2箱中待两三个小时再取出，加培养液的时候一定要小心，让液体从没有组织块的一面流下去，不要加太多，2－3ml就够了，然后慢慢放平培养瓶，让培养液接触到组织块即可，不要使劲晃。在镜下观察的时候也要动作轻，别把组织块晃下来。

mason658616

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4 F% c- `6 H9 R3 u& S$ {8 w一般不会掉下来吧，把组织剪的越小越好，放进去的时候液体不能带太多液体，如果液体比较多就用吸管吸掉，让它靠组织上的一点点液体贴在瓶上。反过来的时候小心点，一般不会掉。如果直接就在底面加培养基很容易把组织块冲起来。

mason658616

回复 henryjia 的帖子
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请问一下，组织块开始往外爬细胞是什么样的？我没见过，也不知道我养的是不是开始爬了。我观察的是组织块光滑的边缘出现像裙子边样的表现，毛毛糙糙不光滑了，有些单层能透光的细胞。还有的是像触角或者枝丫的感觉往外伸。就是不知道是我撕拉的组织块的边缘还是爬出来的细胞，因为刚接种的时候没有在镜下看

mason658616

回复 yanmin 的帖子) _+ C: O- C$ x$ U( D( e5 w

. V# `/ Y5 z  S7 J. _+ C4 T1 I我还没有匀浆，也打算试试，期待你的结果分享啊，呵呵。

mason658616

回复 cactus006 的帖子
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有不少回复怎么让组织块不漂的留言，你可以看看。培养瓶我用的是一次性塑料的，不知你说的包被是怎么弄。塑料的比玻璃的更容易贴一些，自我感觉。

mason658616

回复 henryjia 的帖子
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' R6 L% H1 h  R8 e0 {胶原酶和胰酶，你可以查查文献，有的用胶原酶消化30min再用胰酶消化30min，也有的只用一种酶，也有的用这两种酶但消化时间不一样。胶原酶有用2型和4型的，好像没啥差别。但是提醒你消化完之后会比较黏稠，不好过滤，可以把较大较黏的组织挑到另一个平皿里，多吹打吹打，吸取上清，把沉淀去掉。如果还是黏稠就稀释一下再滤，否则可能把有用没用的都丢掉了。