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请教脐带间充质干细胞培养方法   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-5-10 10:40 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
组织块法和胶原酶消化法哪个比较好?我现在用组织块,但是爬得很慢啊,2周了是不是应该有动静了?
0 w- ]$ M4 y0 V# `胶原酶法我查了查文献,有用2型的,也有用4型的,哪个比较好呢?
# z* d9 ?4 m+ l! ~& A2 x取华通胶好费劲,尤其是要把动脉静脉剥离下来,每次都得弄一两个小时,大家做过的有没有什么经验分享一下?
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沙发
发表于 2011-5-10 11:19 |只看该作者
回复 mason658616 的帖子; s0 w" c, F( S7 ~

) O+ ~  N5 z+ H8 W我最近也在养脐带间充质细胞,用过酶消化法,但是没有成功过,细胞量很少;用组织块培养的话7-10天就有较多的细胞爬出来了,12天之后就可以传代了,组织块不能漂了,一旦漂了就不会有细胞爬出来了
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藤椅
发表于 2011-5-10 16:31 |只看该作者
组织块法10天左右就可以爬出细胞了,建议选择好的脐带,尤其是那种粗的,这样取华通胶也比较方便,细胞也较多。另外,剪得碎一点
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板凳
发表于 2011-5-10 16:31 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
组织块法10天左右就可以爬出细胞了,建议选择好的脐带,尤其是那种粗的,这样取华通胶也比较方便,细胞也较多。另外,剪得碎一点

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报纸
发表于 2011-5-10 16:40 |只看该作者
回复 gaorongbest 的帖子
! M( f% }: E- p' ~* K
( u. V5 c  [' F谢谢。我第一次做的组织块都漂了2周了,没有细胞。第二次的有5天了,这回剪得比较小,而且先底朝上放置了4小时,然后底朝下加了3培养液。现在看组织还贴着,但是还没有细胞爬出来。我该不该换液?我的培养基就用的10%FBS的H-DMEM,可以吗?
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地板
发表于 2011-5-10 16:42 |只看该作者
回复 tingwuyu 的帖子
8 H& g0 m0 F0 I1 Q) y, c; N8 D( t5 T  O( y% @( b; Y+ |
再请教下,用PBS洗干净脐带后要不要在培养基里剪?我觉得干着操作还稍微容易点,有水的话特别滑,但是组织块干着是不是对细胞不好啊
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发表于 2011-5-10 21:50 |只看该作者
两种方法都用过,总体来说,酶消化法细胞爬出来的快一点,也要多一点,胶原酶过夜加胰酶半小时左右,3天左右能见成纤维样细胞,7到10天可第一次传代。组织块法觉得剪刀功夫要好,别怕累,越碎越好,最快的3天也见过成纤维样细胞,但量比酶消化法要少。还有,用的培养皿也有关系,好的皿和差的皿,原代培养所用时间差距很明显。
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发表于 2011-5-10 21:55 |只看该作者
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' r5 E1 u+ m- i& q% V; J# ^
4 {' c6 A+ n! H! s# @( w6 M如果操作时间太长,细胞一直干着,的确对细胞有害。不过加培养基以后基本无法剪到很细了,我还是坚持让它干着……,不过操作快了以后,貌似影响不大。
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发表于 2011-5-10 22:09 |只看该作者
我最近也是在做脐带间充质干细胞的培养,每次剪碎组织后,可以看到有游离出来的细胞,但是细胞一直不会贴壁,我操作的时候是将组织块剪碎后,分别用胶原酶II和胰酶消化,消化后,组织块通过滤网过滤,过滤后的组织块用于贴壁(但是会出现组织块很黏稠的现象,这样会不会影响细胞贴壁?),滤出的细胞通过离心后,用培养基重悬后,于培养瓶中培养。但是现在已经培养十来天了,有细胞,但是细胞不会贴壁,想请教一下大家,来帮我解决一下问题。。。
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发表于 2011-5-10 22:11 |只看该作者
我最近也是在做脐带间充质干细胞的培养,每次剪碎组织后,可以看到有游离出来的细胞,但是细胞一直不会贴壁,我操作的时候是将组织块剪碎后,分别用胶原酶II和胰酶消化,消化后,组织块通过滤网过滤,过滤后的组织块用于贴壁(但是会出现组织块很黏稠的现象,这样会不会影响细胞贴壁?),滤出的细胞通过离心后,用培养基重悬后,于培养瓶中培养。但是现在已经培养十来天了,有细胞,但是细胞不会贴壁,想请教一下大家,来帮我解决一下问题。。。要补充一下,我也做过组织块直接贴壁,是不是要将组织块剪得很碎?大家是取的那部分材料来用于实验呢?是将静脉动脉都去除的组织吗?
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