请教脐带间充质干细胞培养方法

mason658616

组织块法和胶原酶消化法哪个比较好？我现在用组织块，但是爬得很慢啊，2周了是不是应该有动静了？
7 @0 f% z# Y# v% K0 V& ?胶原酶法我查了查文献，有用2型的，也有用4型的，哪个比较好呢？4 _3 h+ m0 m+ a4 K
取华通胶好费劲，尤其是要把动脉静脉剥离下来，每次都得弄一两个小时，大家做过的有没有什么经验分享一下？

gaorongbest

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我最近也在养脐带间充质细胞，用过酶消化法，但是没有成功过，细胞量很少；用组织块培养的话7-10天就有较多的细胞爬出来了，12天之后就可以传代了，组织块不能漂了，一旦漂了就不会有细胞爬出来了

tingwuyu

组织块法10天左右就可以爬出细胞了，建议选择好的脐带，尤其是那种粗的，这样取华通胶也比较方便，细胞也较多。另外，剪得碎一点

tingwuyu

组织块法10天左右就可以爬出细胞了，建议选择好的脐带，尤其是那种粗的，这样取华通胶也比较方便，细胞也较多。另外，剪得碎一点

mason658616

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* e( D& m! T' o
' j% u: M/ r( L* j8 ^* m谢谢。我第一次做的组织块都漂了2周了，没有细胞。第二次的有5天了，这回剪得比较小，而且先底朝上放置了4小时，然后底朝下加了3培养液。现在看组织还贴着，但是还没有细胞爬出来。我该不该换液?我的培养基就用的10％FBS的H-DMEM，可以吗？

mason658616

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再请教下，用PBS洗干净脐带后要不要在培养基里剪？我觉得干着操作还稍微容易点，有水的话特别滑，但是组织块干着是不是对细胞不好啊

福牛

两种方法都用过，总体来说，酶消化法细胞爬出来的快一点，也要多一点，胶原酶过夜加胰酶半小时左右，3天左右能见成纤维样细胞，7到10天可第一次传代。组织块法觉得剪刀功夫要好，别怕累，越碎越好，最快的3天也见过成纤维样细胞，但量比酶消化法要少。还有，用的培养皿也有关系，好的皿和差的皿，原代培养所用时间差距很明显。

福牛

回复 mason658616 的帖子9 `9 g8 h* L( k' |) H9 u) \2 `& y

! U1 ]- J, U+ K) N. l, n  W如果操作时间太长，细胞一直干着，的确对细胞有害。不过加培养基以后基本无法剪到很细了，我还是坚持让它干着……，不过操作快了以后，貌似影响不大。

yanmin

我最近也是在做脐带间充质干细胞的培养，每次剪碎组织后，可以看到有游离出来的细胞，但是细胞一直不会贴壁，我操作的时候是将组织块剪碎后，分别用胶原酶II和胰酶消化，消化后，组织块通过滤网过滤，过滤后的组织块用于贴壁（但是会出现组织块很黏稠的现象，这样会不会影响细胞贴壁？），滤出的细胞通过离心后，用培养基重悬后，于培养瓶中培养。但是现在已经培养十来天了，有细胞，但是细胞不会贴壁，想请教一下大家，来帮我解决一下问题。。。

yanmin

我最近也是在做脐带间充质干细胞的培养，每次剪碎组织后，可以看到有游离出来的细胞，但是细胞一直不会贴壁，我操作的时候是将组织块剪碎后，分别用胶原酶II和胰酶消化，消化后，组织块通过滤网过滤，过滤后的组织块用于贴壁（但是会出现组织块很黏稠的现象，这样会不会影响细胞贴壁？），滤出的细胞通过离心后，用培养基重悬后，于培养瓶中培养。但是现在已经培养十来天了，有细胞，但是细胞不会贴壁，想请教一下大家，来帮我解决一下问题。。。要补充一下，我也做过组织块直接贴壁，是不是要将组织块剪得很碎？大家是取的那部分材料来用于实验呢？是将静脉动脉都去除的组织吗？