请教脐带间充质干细胞培养方法

almasun97184

还要加透明质酸酶，可以消化完全，不用过滤。

农夫有点田

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! A; v2 |1 \9 x; u您说的培养皿 可是T75培养瓶么? 这个真的跟培养瓶有关系啊？我和想知道http://www.stemcell8.cn/thread-39788-1-1.html  这是我发的帖子

福牛

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- A( N; g1 N  D: ]* z$ K0 j: F8 g) ?
恩，是的，我一般一根脐带根据所留取的组织量多少，用400到800ML生理盐水洗涤，然后接皿，3天左右换去半液或直接补充几毫升含血清的培养基。用酶消化法的话，印象中三天都可以见贴壁细胞的。

yanmin

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- h8 j" \) ]4 d" R/ g/ U我用的就是胶原酶消化过夜，然后在用胰酶消化半个小时，是看不到组织块了，离心后也可以看到细胞了，但是细胞不会贴壁生长，请问在培养基里还需要添加什么生长因子之类的吗？还是需要包被板子？

yanmin

我现在通过酶消化可以分离出单个细胞来，但是细胞不会贴壁生长，想请问一下是不是在细胞培养的时候需要加入什么生长因子？还是培养基的PH需要调节？还是需要包被板子？谢谢~~~

mason658616

回复 yanmin 的帖子% I1 N/ I! |1 n5 D. d

% H7 U/ P$ z- ~0 P- a) ~问一下您的酶各自消化多长时间？常温吗？用不用一直摇着？消化完很粘稠怎么解决，我看有人说用透明质酸酶，不知是否可以。这些酶消化终止的方法都是加含血清培养基吗？

yanmin

回复 mason658616 的帖子& B. t3 S( r! S
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我没有用过透明质酸，我是用胶原酶消化过夜后再用胰酶消化半个小时，消化后消化液很黏稠，我是用含血清的培养基终止的。细胞是出来了，但是就是不能贴壁。。。。

mason658616

回复 yanmin 的帖子  n3 l6 E( m$ A/ @. I+ j
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我昨天做了一次胶原酶消化的，是这样做的：把组织块放离心管里加2-3倍体积的胶原酶，37°摇30分钟，此时还有组织块，过滤，取滤液离心，但是我怀疑上清里也有细胞就把上清倒在一个单独的培养瓶里了。沉淀用PBS洗两遍，再用培养基悬浮，接种培养瓶。镜下观察上清和沉淀均有不少细胞，当然沉淀的细胞量更大。剩下的组织块又加胶原酶37°摇30分钟，相当于总共消化1小时，但这遍的细胞数明显少很多，几乎没有细胞。还是有残余组织块，我又用胰酶消化了30分钟，还是有组织块，这次就连组织块和细胞悬液一起放瓶子里了。
6 ]2 x! [" F7 |9 d+ q, S& b不知组织块不消化完全会不会影响细胞的量和生长，今天看看贴壁怎么样，再来汇报

mason658616

昨天看了下细胞，上清细胞不少但都不贴壁，看来可以弃掉，不用心疼。其他瓶都有贴壁，尤其是第一次消化的。但是根据养骨髓的经验，爬出细胞的多少跟细胞密度关系不大，小黑点是关键。我也是刚开始养，还请各位帮忙分析

zhangruiting

我们实验操作中用的是胶原酶消化法  生长比较快  一般三四天就有细胞长出  不过其中分离的时候比较麻烦  最好选用比较粗的脐带并且血流量少的  整个处理过程最好在一个小时完成这样对细胞的损害也比较小