请教脐带间充质干细胞培养方法

cactus006

回复 tingwuyu 的帖子
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2 q0 J* i* T+ h6 o7 q您好，怎么能让组织块不漂呢？如果培养瓶是否需要包被呢？

mason658616

回复 zhangmingqi111 的帖子; q- I9 d/ Z$ x( r
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用吸管把组织块一个一个加到培养瓶了，摆放好后可以把多余的液体吸出来，然后盖好瓶盖把贴有组织块的底面朝上，放在co2箱中待两三个小时再取出，加培养液的时候一定要小心，让液体从没有组织块的一面流下去，不要加太多，2－3ml就够了，然后慢慢放平培养瓶，让培养液接触到组织块即可，不要使劲晃。在镜下观察的时候也要动作轻，别把组织块晃下来。

yanmin

回复 tangyvhuang 的帖子/ O/ O6 E* R5 J' u7 _$ f) z: C$ w

  ]" C5 |6 X0 D- m4 x我昨天又做了一次，用胶原酶消化过夜，然后第二天早上又用胰酶消化，消化的组织块过筛网，滤液离心，离心下的沉淀用低糖DMEM重悬后，铺到培养瓶中，在镜下可以看到细胞了，现在就看细胞能不能贴壁生长了

yanmin

回复 leungyk 的帖子: l" i6 W8 \$ s7 o0 k! {. i' c3 W
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我想请问一下，你是大概加多少培养基呢？在放置的这一周，不用补充培养基吗？组织块会不会干掉呢？

yanmin

回复 mason658616 的帖子( [9 p5 |' C+ b6 ]! J$ F

. N& l- ?7 ~1 T6 [3 z# c) O8 k谢谢~我昨天做的时候就把动脉和静脉都去除掉了，我下次做打算试试匀浆，因为用剪刀剪总是剪得不是那么碎，看起来组织块已经很小了，但是铺到瓶子里的时候，还是觉得有点大了。

yanmin

回复 福牛 的帖子: m; x) F1 f: G  q; e
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你是直接把消化后的组织块用生理盐水洗涤，然后离心，离心下来的细胞和组织一起用培养基重悬，然后铺板子是吗？

leungyk

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9 y9 s' d  {6 p3 s" b. x" D+ K回复 yanmin 的帖子7 a9 G) S( E& W

9 z1 M+ ^& e' `8 t7 \我也是放2-3ml， 沒有換液，一個星期後並沒有乾~

zhangmingqi111

回复 leungyk 的帖子
: Y: w% D8 {1 `8 o: q. W" e; Y" c5 m2 j( F! P
培养瓶或皿倒置的目的什么呢？当培养瓶倒置时，根据重力作用，组织块会落到非培养面，然后再正置时，组织又会落到培养面上，为什么不直接让其在培养面上生长呢？

henryjia

真高兴有这么热烈的讨论，分享一下我的经验。
* {" V$ q$ W! g; g. m2 h$ M& |% k0 e+ V7 ^& q2 _1 q
首先我的经验发现用酶消化和切块消化没有明显区别-指分离出的细胞没明显区别， 我是根据FACS表面抗原检测结果和成骨，成脂肪细胞分化功能实验结果来说的。其实切块法，很大程度是取决于胶原蛋白，弹性蛋白等ECM成分蛋白自然分解儿使得细胞释放，至少我的组块漂浮也一样在10天左右发现细胞长出。 而酶消化法显而易见的提高效率。

henryjia

再说一下消化酶和时间的选择：
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. e4 V; Q- d+ o8 H我是使用胶原酶I联合透明质酸酶，大约消化1-2个小时，此过成必须不停震荡！！！个体差异导致时间差异。尝试过继续胰酶消化，似乎意义不大。) N, d) C$ y- v) |! X. T: ^

2 V/ q# Z: q- e不建议过夜消化，时间太长，细胞损伤很大。如果一定要这么长的话，要用含血清的培养液配置消化酶溶液，以保护细胞。1 Z! |% t, X6 N; X8 S% ^- m2 X$ Z

9 N5 ~/ ~" I. b2 m! z2 ^+ t还有些要说，但是太累了，主要要点在这里了。找时间再给大伙补充。