请教脐带间充质干细胞培养方法

tangyvhuang

楼主的头像有点另类

tangyvhuang

组织块培养的话，组织块要剪碎然后小心的贴到培养皿底，组织块之间距离不要太大，培养液要三天一换的，我一般用低糖的DMEM不用在培养基里面剪碎，不干了就好，但是也要注意别拖拖拉拉的很长时间，; T( g& H9 f& ^2 N8 b7 D
酶消的话，2型跟4型都可以，我比对过没有什么明显差别，，今天没心情细说。* ~0 @* A( E$ P$ I7 G

tangyvhuang

yanmin 发表于 2011-5-10 22:09
  C" `( E6 f; M我最近也是在做脐带间充质干细胞的培养，每次剪碎组织后，可以看到有游离出来的细胞，但是细胞一直不会贴壁 ...

* M+ _: P1 P4 k8 t6 \# c我觉得酶消之后的参与组织块再贴壁不会有细胞爬出来的，我以前试过没什么结果。过网晒？这时候的消化液很粘稠吧，之前要大量稀释一下的，我觉得你过完网筛之后的东西里面没有什么间充质了吧，是不是都是红细胞之类的小细胞了吧

gaorongbest

回复 mason658616 的帖子
$ k; Z6 F$ c. T4 A/ y8 Q1 l4 I# x0 Q  ~) z* x
我们都是用皿接种，没用过瓶子，你可以半量换液，一般用D-F12培养，没用过高糖DMEM，你可以对比一下

leungyk

  l; r& y6 p& B我也正在試，還未成功！
4 c/ p% L  D% Q. W0 o用组织块~ 得一点点細胞爬出來，但不太像MSC
: K) V8 ?$ s3 }! r" a& z我們是用一型胶原酶的~ 也試過2型，沒太大分別
9 N6 x( D/ {: p/ h9 [
6 `( A( @; p! k$ N. C& e' a8 x把动脉静脉剥离，初初是有点煩，但慢慢就變得熟練了，我會用剪刀在中間剪開，不會分成小段，用鉗子撕開組織，动脉静脉就自然走出來，拉一拉就可以了！
7 ~  C3 S4 T8 m3 g6 K1 c0 Y, C0 @" N! x/ }! D# M
成功的前輩們，你們是用什麼培養液的？
  L& U! t5 v. H* A' o1 B; x我正在試 DMEM/F12+15%FBS, StemPro, MesenCult, 10天了，只得幾個細胞走了出來！* y" g, Y$ t$ D1 X
唉~
! U" t, V; x1 S; ^

mason658616

回复 yanmin 的帖子9 u: H$ v$ D& _4 B: l* |1 b" W
7 k5 I% ~3 g3 u: {( Y5 c& p
我的细胞从贴组织块到今天6天了，一些组织块周边似乎有往外爬的迹象，组织块是贴着的，但是外周是漂着的。我没用酶消化，就是把脐带外膜和血管剔除后，取的华通胶，剪得尽可能小，先贴在底上，把培养瓶底朝上养4个小时，再加培养液，底朝下正常养着。要是养脐带MSC应该是不要动静脉的，否则养出来东西比较杂。因为脐带可以养内皮细胞、干细胞和间充质干细胞。

福牛

回复 yanmin 的帖子
+ f0 m: `- j) I1 V4 [7 z
) G3 |% s, F. ?& T: o不知道你用酶消化多长时间，我认为酶消化后对于本来就很细的组织快会有一部分细胞爬出来，如果过滤掉只剩余组织块是不是有点浪费。我没有过滤过组织块，消化后用生理盐水洗涤离心后接皿。换液时候自然把组织块换去。两种方法一般都要去除静动脉和羊膜，剩下的组织要剪的很碎，大约一立方毫米左右小块，越细越好，加培养基的时候别太多，把组织块飘起来的话不利于细胞贴壁。

sj842563

我正在养，酶消化和贴壁都养出来过，但是还没等鉴定呢就都老化了，而且实验的重复性也不好，

zhangmingqi111

回复 gaorongbest 的帖子, U7 @# Y. U/ H# V0 D) d; ]

/ j# s" N3 }& S: s4 X请问一下怎么保证贴壁的组织块不漂起来呢？

leungyk

回复 zhangmingqi111 的帖子( L' v/ e+ o- C+ }7 f6 w) a

9 |$ a3 ]+ _9 c/ j5 b7 H$ F8 ?我用這個方法:
1 S8 N) u7 h& R剪碎以后均匀铺开组织块，倒置培养皿，放入37°培养箱，一个到一个半小时取出，延边源缓缓加入培养基，一定不要冲起组织块，要让培养基逐渐蔓延整个培养体系，再多加点，放入培养箱内，不要动，一周后上镜看
% m) w7 H. i/ @" b" I3 k+ I# o6 V) O( \效果很好，漂起的不多