请教脐带间充质干细胞培养方法

mason658616

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# g0 |0 O/ P1 h: l; Z% O问一下您的酶各自消化多长时间？常温吗？用不用一直摇着？消化完很粘稠怎么解决，我看有人说用透明质酸酶，不知是否可以。这些酶消化终止的方法都是加含血清培养基吗？

mason658616

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我昨天做了一次胶原酶消化的，是这样做的：把组织块放离心管里加2-3倍体积的胶原酶，37°摇30分钟，此时还有组织块，过滤，取滤液离心，但是我怀疑上清里也有细胞就把上清倒在一个单独的培养瓶里了。沉淀用PBS洗两遍，再用培养基悬浮，接种培养瓶。镜下观察上清和沉淀均有不少细胞，当然沉淀的细胞量更大。剩下的组织块又加胶原酶37°摇30分钟，相当于总共消化1小时，但这遍的细胞数明显少很多，几乎没有细胞。还是有残余组织块，我又用胰酶消化了30分钟，还是有组织块，这次就连组织块和细胞悬液一起放瓶子里了。2 N, p+ v' F) f2 i& Z& z  A# M, u$ q' U
不知组织块不消化完全会不会影响细胞的量和生长，今天看看贴壁怎么样，再来汇报

mason658616

昨天看了下细胞，上清细胞不少但都不贴壁，看来可以弃掉，不用心疼。其他瓶都有贴壁，尤其是第一次消化的。但是根据养骨髓的经验，爬出细胞的多少跟细胞密度关系不大，小黑点是关键。我也是刚开始养，还请各位帮忙分析

mason658616

回复 mbpsky 的帖子1 L& O, C- N' F
" z3 l, t# T7 T9 l
谢谢，讲得很详细。我好久没做脐带了，一直在养骨髓的。因为之前的脐带都失败了，不敢养了，呵呵。可以再试试看。再次感谢啊！

mason658616

回复 wangweilie0418 的帖子
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: Q( u  W% ^5 |我也觉得组织块贴壁法要好，酶消化法很难有细胞贴壁

mason658616

回复 Demon_820 的帖子' z5 U( Q7 r+ V
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讲得很详细，多谢！再问一下2：1组织镊是最小号的镊子吗？我感觉把静脉剖开后很难分辨静脉壁和华通胶，直接用镊子把静脉壁扯掉会不会同时损伤要留下的华通胶的细胞呢？我只是去除动脉，感觉还比较容易，静脉没剥过，下回试试。您做的时候羊膜还剥掉吗？我是直接从上面剔组织，没剥羊膜。