请教脐带间充质干细胞培养方法

almasun97184

先剥掉动静脉，此过程半小时。. `7 A4 ^# ?; o9 a+ ?, w0 y
然后我们是用各种酶的混合物消化16个小时，混合物比例不好透露，专利申请中。# c/ |9 O1 Q7 s0 e; y2 F
第二天就基本上看不到组织了，皿里头全是单个细胞和胶原。  `, Z$ Q6 }8 _4 B2 m0 T
离心洗涤就能种植了，此过程半小时。! ~6 E5 Z# ^' a) G4 L
一周可传代，百发百中，细胞也没有明显损伤。

gaorongbest

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% A; ?4 s7 d, T% T刚开始记得加一点点培养基，不要加多了，不然组织块就易飘起来，贴不了了，第二天补加一点，到第三四天时再半量换液，吸的时候要轻

sunjianhua2000

我也正在做脐带间充质干细胞培养，目前正在观察中，我用的培养液是L-DMEM+15%FBS，据说这种浓度比较好。随时关注你的实验，一起探讨。

leungyk

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這個~我不大清楚！我是從書裡看到的，還有這裡的師兄也提到這方法

mason658616

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8 c% y5 ?3 M8 P7 Z, O% f: w9 z一般不会掉下来吧，把组织剪的越小越好，放进去的时候液体不能带太多液体，如果液体比较多就用吸管吸掉，让它靠组织上的一点点液体贴在瓶上。反过来的时候小心点，一般不会掉。如果直接就在底面加培养基很容易把组织块冲起来。

mason658616

回复 henryjia 的帖子2 t* o; P. e3 a' S5 Y! W1 i
4 }- F6 z# G+ J, E1 a. v
请问一下，组织块开始往外爬细胞是什么样的？我没见过，也不知道我养的是不是开始爬了。我观察的是组织块光滑的边缘出现像裙子边样的表现，毛毛糙糙不光滑了，有些单层能透光的细胞。还有的是像触角或者枝丫的感觉往外伸。就是不知道是我撕拉的组织块的边缘还是爬出来的细胞，因为刚接种的时候没有在镜下看

mason658616

回复 yanmin 的帖子4 ]3 j) t) U( P6 s* s% [  [4 I" M
5 b0 }) F2 `: V
我还没有匀浆，也打算试试，期待你的结果分享啊，呵呵。

mason658616

回复 cactus006 的帖子
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有不少回复怎么让组织块不漂的留言，你可以看看。培养瓶我用的是一次性塑料的，不知你说的包被是怎么弄。塑料的比玻璃的更容易贴一些，自我感觉。

henryjia

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不说比例，就告诉有什么酶行吗？

mason658616

回复 henryjia 的帖子5 d7 O) k$ l. ]2 O3 K8 M

% }& @3 ~' b+ N, U1 K胶原酶和胰酶，你可以查查文献，有的用胶原酶消化30min再用胰酶消化30min，也有的只用一种酶，也有的用这两种酶但消化时间不一样。胶原酶有用2型和4型的，好像没啥差别。但是提醒你消化完之后会比较黏稠，不好过滤，可以把较大较黏的组织挑到另一个平皿里，多吹打吹打，吸取上清，把沉淀去掉。如果还是黏稠就稀释一下再滤，否则可能把有用没用的都丢掉了。