请教脐带间充质干细胞培养方法

mason658616

组织块法和胶原酶消化法哪个比较好？我现在用组织块，但是爬得很慢啊，2周了是不是应该有动静了？4 E. b; a6 i) }9 T
胶原酶法我查了查文献，有用2型的，也有用4型的，哪个比较好呢？8 {/ T1 b: b* f1 {" Y* M4 \' ]
取华通胶好费劲，尤其是要把动脉静脉剥离下来，每次都得弄一两个小时，大家做过的有没有什么经验分享一下？

dophins

最好的是将动脉及静脉去掉，有利于细胞的爬出生长

mason658616

回复 Demon_820 的帖子" C, R# P3 v- M' P! \: k

% ]$ u! |& N  A( q' M. m. I讲得很详细，多谢！再问一下2：1组织镊是最小号的镊子吗？我感觉把静脉剖开后很难分辨静脉壁和华通胶，直接用镊子把静脉壁扯掉会不会同时损伤要留下的华通胶的细胞呢？我只是去除动脉，感觉还比较容易，静脉没剥过，下回试试。您做的时候羊膜还剥掉吗？我是直接从上面剔组织，没剥羊膜。

Demon_820

我也是养脐带干细胞的!我用的是纯组织块培养法!分离剥胶有技巧.先将脐带分段,沿
2 i1 d. b% z% h3 @, s6 r2 o动脉将血排出(血多会影响胶纯度。也影响视线分辨率。你懂的)。用应用弯头剪刀沿静脉剖开,用2:1组织镊去除静脉壁!将两条动脉用镊子撕成裸露状态,然后剔除!这样剩下华通氏胶和羊膜* m2 v) i2 Y. T2 {# B0 t/ M

mason658616

回复 wangweilie0418 的帖子& m; a2 C) f6 U

& O" E+ f/ k2 ]/ [- U5 \0 i( b我也觉得组织块贴壁法要好，酶消化法很难有细胞贴壁

mason658616

回复 mbpsky 的帖子+ a) Q# J) i0 E* \

4 `2 i2 [. Q* t! k1 ~0 Y谢谢，讲得很详细。我好久没做脐带了，一直在养骨髓的。因为之前的脐带都失败了，不敢养了，呵呵。可以再试试看。再次感谢啊！

wangweilie0418

     看文献酶消化法可以用单酶法及双酶法，至于我们做用的是组织块培养。也就是前面有人说过的倒置干涸培养，一般贴了壁的组织块均有细胞爬出，甚至有些贴了不久就掉下来的都有细胞长出，最好是在换液时仔细的观察，刚刚长出来的细胞挺不容易被看见的，观察时主要看组织块周围和有贴痕的地方。个人感觉这种方法还是比较容易培养的。

mbpsky

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两种方法培养出来过。一般而言，我喜欢用组织贴块法，而且我喜欢用T25培养瓶倒置干涸法。脐带优质的话，第三天就可以爬出来，一周内就可以完成原代原代培养进入传代。当然，爬出来的时间与脐带质量有关系。而且量很大啊，你只要用一小丁点组织，你就可以获得一瓶细胞。而且省酶省时间，一次操作一个半小时搞定所有原代分离接种。
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3 s3 h& N6 E" L5 L关于酶消化法。胶原酶过夜加胰酶4小时左右，一般的话，5天左右能见成纤维样细胞。但时间和精力消耗大。一拖那么长时间。还费酶。
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7 H7 o% e6 ]1 f0 N% i7 }6 j不过细胞的爬出快慢，还要取决于你对两种方法的熟练度和培养基的优良度，并非一概而论

saintwang6521

我也是分别用胶原酶II和胰酶消化，消化后，组织块通过滤网过滤，会出现过滤液很黏稠的现象，过滤后的细胞也不多，求助！

zhangruiting

我们实验操作中用的是胶原酶消化法  生长比较快  一般三四天就有细胞长出  不过其中分离的时候比较麻烦  最好选用比较粗的脐带并且血流量少的  整个处理过程最好在一个小时完成这样对细胞的损害也比较小