iPS细胞的传代

ly200101042

我用的是胶原酶IV，室温消化5min后，吸走胶原酶，采用iPS细胞的培养液终止，洗一遍后，用枪头轻轻吹，吹下来的全都是MEF细胞，这个是为什么啊，我的iPS克隆还在板上呢啊，这个是怎么回事啊- u% q+ `+ `0 T2 U% {9 f5 `3 N
我是新手，希望吧里的各位兄弟姐妹多多帮助！:handshake

gact

你已经诱导成功了？
2 f1 Y0 V' H' @, [9 F, f7 ]' e6 w

SCNT

用PBS洗涤了吗？

christophe

因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清不影响胶原酶IV的活性，无须终止，直接吸弃即可；
% l$ y+ o( y6 x/ W7 P, _如果还是消化效果不好，可以再用0.15的胰酶（之前用PBS洗一下）消化1-2分钟，然后血清培养基终止反应，在用枪头吹打一下基本上就能分散开了。

ly200101042

SCNT 发表于 2011-5-15 08:58
4 |: i! m. J1 S8 V0 I/ k. n用PBS洗涤了吗？

: b& ]/ q% B: k3 b! a0 ?" \% v
洗了啊

ly200101042

christophe 发表于 2011-5-15 12:22 3 B1 {* {  I; q( U* c
因为ips已经形成克隆，细胞数较多，且克隆较为致密，室温五分钟有点短了，可以在37℃，延长些作用时间。血清 ...

- r" z  a# K4 p. X0 _呵呵 还行请教下您啊2 j" y# c/ X6 [% G6 D/ |0 o9 \' l
那MEF细胞也一起下来了啊: ^; c  j6 p3 b/ a0 q1 y; g4 h
为什么我觉得我iPS细胞比MEF贴壁牢呢啊

ghfvcat

胶原酶IV，室温消化5min？
6 Y2 h! d+ L: g5 m, D3 h* q时间这么短就能消化下来啊，是小鼠的？好奇怪，消化人的时候一般都要消化上大半个小时的。

牙牙丫丫123

一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……9 g  v* b4 D# }  g" S- Y# A& Q

ly200101042

回复 ghfvcat 的帖子' k( q  |; H% Q
" P- }9 S) x8 t' k
为什么那么长时间啊 5 z4 _2 Z' Q& L8 G/ U8 A% Y
您是说分原代还是已经培养若干代了吗

ly200101042

牙牙丫丫123 发表于 2011-5-15 17:50 . e: _0 y* c: ~6 U! ^# e+ F3 y9 C
一般0.1%胶原酶4都要消化2个小时左右的……

( ]5 l" A( d0 w& ~* e" s. a; ]我用的是1mg/ml 应该是1%的吧