PCR亚克隆

nekdgf4

我做的6 y7 O! W( ^2 y; I) a- @
基因:2ul2 Q# w0 ~: `1 R  H
上下游引物:0.5 ul
3 A8 p  {9 x% [: n$ a' ]4 m; t# Q4 Hqd plous :10ul ) L1 M8 p& k* S9 w# |6 L4 [9 f
h2o 阳性：7ul  阴性:9ul
0 g2 ~9 Z  e. C分别做了5支，加一支阴性管8 A! D: M4 W' r; `. K& l+ Z; @
电泳结果是阴性和阳性条带长短，亮度都差不多，是什么原因啊# v: a" x- m/ D: s9 x6 W
引物和水应该不会污染，还有加样很小心8 S! u# e+ Q. J2 P
怎么阴性还是出了
6 ?' x3 e0 B, J: P1 F/ d9 a还要继续胶回收吗？

jun8013

引物污染，概率很大，也可能空气污染，你所操纵的环境污染，做的次数多了？但一般是引物污染概率大，不行就去无菌室做一次。

hndxws

条带大小是否是你想要的大小？该现象是否有重复性？这两个问题比较关键

张也行

如果你的基因在实验室做的很多，那么很可能酶，水，引物都已经污染了。正如楼上所说的，如果你的结果能重复的话，那最好所有都换新的，连地方都换个新的。呵呵 去其他实验室做做看

chliu

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( f& n* L5 t* g! [. i4 q" \. e) N) v! ~
扩出来的条带大小和预期的相同么？如果相同的话，很有可能阴性管里污染进去了模板。如果片段大小与预期的不同，那各个成分都有可能被污染了其他的东西。

chliu

回复 nekdgf4 的帖子8 S2 A1 {6 j7 i4 w

" M; z9 R! R! [# V, ^; {建议就不要胶回收了，重新做PCR