参加2011年6月3日同济大学干细胞技术临床转化应用讲座的一点体会：

scienese

20110604
* ~) K9 |  X' D" U金颖老师讲课总结
8 T* M; h+ M3 {, B! z9 R4 j+ aStem cell 定义：self-renew 、differenation4 y& F8 I* r4 f' d+ d) n
八细胞之前叫全能干细胞（totipotent），之囊胚叫亚全能干细胞（pluripotent），再往下叫多能干细胞（multipotent）如造血干细胞和单能干细胞（unipotent）如皮肤干细胞。
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" z4 o; D/ V: Y( p+ x% O在胚胎着床以前叫胚胎干细胞（embryonic stem cell）在着床以后叫epiblast。
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4 \; X1 X4 ^9 X/ J分离胚胎干细胞有两种方法：免疫外科法，机械法  机械法难度高耗时耗力但金颖老师实验室使用此方法，免疫外科法 要掌握好补体配体的浓度以及作用时间; ]* A% e! p0 H6 E# r+ {

- h" P' s5 A2 t0 ^' u; U分离胚胎干细胞最重要的一条是要找到优质的胚胎，周围滋养层细胞呈半月形时最好，将内细胞团剥离后放置于滋养层上7-9天后看有没有clone长起来，如果没有可以延长观察时间至两周，把内细胞团放置于饲养层上前两至三天不能看（place ICM on to feeder layer）防止内细胞团漂浮或与feeder 贴不紧。
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维持胚胎干细胞多能性的三大关键因素：a饲养层细胞，饲养层细胞密度很重要 有的胚胎干细胞系喜欢密的有的则喜欢较稀的    b  bFGF 最佳浓度为4-8mg/ml   c传代 胶原酶 胰酶 机械法 金老师提倡用机械法 因为胰酶处理后对细胞伤害特别大 很容易就分化 胶原酶也不提倡 金老师实验室的学生传一个6cm 需要两个30min 特别辛苦
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细胞分化研究包括三个方面:1,形成拟胚体（EB）拟胚体内就有三胚层细胞  2，co-culture with other      3，monolayer culture with defined medium; h. {. w. H9 ?! C* M
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鉴定胚胎干细胞工作% i' _" A5 b9 i* ^
核型正常 7 i+ m- j! |! _: I, Y* D1 ~5 y
能传超过70代次
1 N+ h4 y/ I/ U能冻存和解冻  人胚胎干细胞不能消化成单个细胞保存 单个细胞特别容易死 每解冻一次都像从新分离一次
) G/ D% ~; D& O, V1 ?自我更新
1 D# o; H- G& Q  l表面标记检测，包括 Real-time、免疫荧光、基因表达谱分析
/ X0 m4 |% e" Z1 e. ?) |: x/ \端粒酶活性
* h! S3 L' V7 V# Q畸胎瘤, T, I' q5 t# g/ p9 y* z- [2 q7 m
嵌合体动物
2 {/ |) |% F! Z* x; [( N: Z2 \  v
3 z$ K5 m; R- I2 Y康九红老师主要讲了Chip技术 利用转录因子chip-seq和核小体分辨率chip-seq 一般能将发挥某一功能的转录因子缩小至3-5个转录因子4 B2 Q7 S4 J! F, _* u3 S' f

' N$ ~- d% V& D0 V# f& c% V! u- n还讲到甲基转移酶 不同的甲基转移酶参与不同的甲基化反应  有的甲基化有利于胚胎干细胞分化，有些甲基化则能使成体细胞重编程
  g) _' b$ H, s( h5 V! b, _3 e4 J* g7 x/ o9 v7 O& z
下午
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周琪老师讲干细胞的多能性和安全性) t. B0 `* ?9 W' Y' T) S9 E
周琪研究组还在尝试做猪的胚胎干细胞
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. x! d/ q' ~) k9 I' T, p        Oct-4        SSEA-1        SSEA-3        SSEA-4        TRA-1-40        TRA-1-81
8 ~. h2 f4 f* P: ^- x, c' O3 O Mouse
* \( U0 @# V3 j: s, oESCs         +        +        —        —        —        —5 x1 m! |  }* |0 P
Rabbit
7 y  [" q1 u( x; c& f  ESCs        +        +        +        +        +        ++ \$ N( u: n. v5 X
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9 U& [8 ?8 B9 U: ]2 \1 L6 S+ g; H4 k   ESCs        +        —        +        +        +        +
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! B/ S3 O7 Q. H2 _  b赵春华老师
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DKK 抑制wnt 通路beta-actin  是通过激活nanog 来对beta-actin发挥作用 已发表 可查
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